作者 : 岳保红 单位 : 郑州大学第一附属医院 第十章 其 他 检 测 第二节 基因诊断 第三节 流式细胞术及其临床应用 第一节 染色体检测 第四节 床旁检测 重点难点 掌握基因诊断的含义、分子杂交技术、聚合酶链反应、流式细胞术的定义。 基因诊断、流式细胞术、染色体核型分析在临床中的应用。 POCT的概念和临床应用。 染色体检测 第一节 诊断学（第9版） 一、染色体检查、染色体命名和书写方法 1.染色体检查 将待分析的细胞进行短期培养后，经过特殊制片和显带技术，在光学显微镜下观察分裂中期的染色体，确定染色体的数目及结构是否发生畸变，是确诊染色体病的基本方法 染色体检查的标本除常用外周血外还可以用骨髓细胞、皮肤细胞、黏膜和羊水中的细胞等 诊断学（第9版） 2.染色体命名 根据人类细胞遗传学命名的国际体制（ISCN），人类46条染色体按其长短和着丝粒的位置编为A～G7组，包括1～22号及X和Y染色体。男性为46，XY；女性为46，XX 根据各染色体上显带特点，将染色体划区分布，p表示短臂，q表示长臂。 “2P35”则表示2号染色体短臂3区5带 一、染色体检查、染色体命名和书写方法 诊断学（第9版） 3.核型分析及其书写 核型书写有统一格式，其书写顺序为：染色体数目、性染色体、染色体异常。 t表示易位：inｖ表示倒位，iso或i表示等臂染色体，ins表示插入，del表示缺失，r表示环状染色体。“-”表示丢失，“+”表示增加等，第一括号内是累及染色体的号数，第二括号内是累及染色体的区带，其中p表示短臂，q表示长臂。 一、染色体检查、染色体命名和书写方法 诊断学（第9版） 二、染色体异常及染色体病 1.染色体异常包括染色体数目异常和结构异常。 2.根据先天性和获得性分为先天性和获得性染色体异常。 3.根据常染色体和性染色体分为常染色体病和性染色体病。 诊断学（第9版） 先天性染色体病病例 二、染色体异常及染色体病 基因诊断 第二节 诊断学（第9版） 一、基因诊断的含义 基因诊断是在基因水平上对疾病或人体的状态进行诊断。它是以遗传物质（如DNA或RNA）为检查对象，利用分子生物学技术，通过检查遗传物质结构或表达量变化与否来诊断疾病的方法。 基因诊断的主要内容 诊断学（第9版） 一、基因诊断的含义 诊断学（第9版） 二、基因诊断在诊断学中的地位 传统的疾病诊断方法：主要是以疾病的表观改变为依据，不能及时作出明确的诊断。 基因诊断：病因的诊断，既特异又灵敏。 （1）可以揭示尚未出现症状时与疾病相关的基因状态； （2）可以对表观异常不明显或不特异的携带者及某种疾病的易感者做出诊断和预测； （3）对确定有遗传疾病家族史的个体或产前的胎儿是否携带致病基因的检测具有指导意义。 诊断学（第9版） 三、基因诊断的常用技术 （一）核酸分子杂交技术 1.核酸分子杂交：两条互补单链核酸（DNA或RNA）在一定条件下按碱基互补原则退火形成双链的过程。 2.分子杂交方法的共同点 （1）应用了核酸序列的复性原理。 （2）采用了标记探针：同位素或非同位素标记的短片段特异DNA或RNA。 常用的核酸分子杂交技术与评价 诊断学（第9版） 三、基因诊断的常用技术 诊断学（第9版） （二）DNA测序 1.DNA测序：测定DNA一级结构 2.临床意义 （1）DNA测序能直观地反映出DNA序列的变化 （2）是诊断未知突变基因的最直接的方法 （3）在遗传病和肿瘤的诊断、法医学的鉴定中具有非常重要的意义 三、基因诊断的常用技术 DNA序列测定常用方法与评价 诊断学（第9版） 三、基因诊断的常用技术 诊断学（第9版） （三）聚合酶链反应 1.聚合酶链反应（PCR） 是利用DNA聚合酶（如：Taq DNA）在体外催化一对引物间的特异DNA片断合成的基因体外扩增技术。反应特异性强，灵敏度高。 2.临床意义 （1）病原体DNA的检测、肿瘤微量残留细胞的检出、遗传病的基因诊断，法医学上嫌疑人或个体遗传物质的鉴定等。 （2）应用RT-PCR还可对RNA病毒如丙型肝炎病毒和待检基因的表达量进行检测。 三、基因诊断的常用技术 诊断学（第9版） （四）连接酶链反应 1.连接酶链反应（LCR） 是一种新的DNA体外扩增和检测技术，主要用于点突变的研究及靶基因的扩增。 2.临床意义 LCR法可以进行单碱基遗传病多态性的快速筛选、单碱基遗传病的产前诊断、微生物亚种和亚型的鉴别、多态性的分析、法医学中个体DNA的准确鉴别。 三、基因诊断的常用技术 诊断学（第9版） （五）单链构象多态性分析 1.单链构象多态性（SSCP）分析 是一种分析突变基因的方法。 2.临床意义 SCP多与PCR技术联用（PCR-SSCP）检测基因突变，提高了基因突变检测的灵敏性，现已广泛用于遗传病及肿瘤基因的分析。 三、基因诊断的常用技术 诊断学（第9版） （六） 限制性片段长度多态性分析 1.限制性片段长度多态性（RFLP）分析 是限制性内切酶、核酸电泳、印迹技术、探针－杂交技术的综合应用。 2.临床意义 （1）广泛地应用于遗传病的连锁分析， （2）还可用于基因组同源性分析以及个体识别。 三、基因诊断的常用技术 诊断学（第9版） （七）单核苷酸多态性（SNP）分析 SNP的特性 三、基因诊断的常用技术