1 第三章 药物的杂质检查 2 第二节 杂质的检查方法 第三章 药物的杂质检查 3 一、杂质的研究规范 ※△二、杂质的常用检查方法 4 化学方法 ※△ 色谱方法 光谱方法 物理方法 二、杂质的常用检查方法 5 （一）化学分析法 6 （二） 色谱分析法 P105 ※△ 7 (一). 薄层色谱法（TLC） 灵敏、简便、快速， 不需要特殊的设备、费用低， 具有分离和鉴定双重作用. 1.优点 8 1)检测灵敏度 2)比移值 3)分离效能 2. TLC的系统适用性实验 9 首先确认存在的待检杂质是什么,并且能够得到杂质对照品。 (1) 杂质对照品法 3. 常用方法 10 供试品溶液：50mg/ml的甲醇液 对照品溶液：N-甲基哌嗪50μg/ml的 甲醇液 板：硅胶G 点样：10μl 展开剂：CHCl3-CH3OH-NH3·H2O(13:5:1) 显色：碘蒸气中 判断：供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点，其颜色不得深于对照品溶液的斑点。 例：枸橼酸乙胺嗪中检查N-甲基哌嗪 11 12 (2)供试品自身稀释对照法 适用于杂质的结构不能确定，或无杂质对照品的情况。 将供试品按限量要求稀释到一定的浓度作为杂质对照液 13 供试液：3mg/ml 对照液：60?g/ml(供试液稀释50 倍)供试液与对照液分别点于同一薄层板 例：氢化可的松中“其他甾体” 检查 14 判断：供试品溶液的杂质斑点数≯3个,且供试品溶液的杂质斑点颜色≯ 对照液 主斑点颜色. 15 供试液：20mg/ml 对照液：0.2mg/ml(供试液稀释100倍)供试液与对照液分别点于同一硅胶GF254薄层板 例：吡罗西康中有关物质的检查 16 展开剂：氯仿-丙酮-甲醇(25:25:5) 紫外灯(254nm)观察 判断:供试品溶液如显杂质斑点 其颜色≯对照液 主斑点颜色. 17 (3)杂质对照品法与供试品自身稀释对照法并用 当药物中存在多个杂质时,有杂质对照品的用杂质对照品法.杂质的结构不能确定，或无杂质对照品的情况用供试品自身稀释对照法. 18 选用质量符合规定的与供试品相同的药物作为杂质对照品。 要求所选用的对照品中所含待检杂质应为规定的限量水平,且稳定性要好。 (4)对照药物法 19 （1）内标法 （2）外标法 （3）加校正因子的主成分自身对照法 (二) 高效液相色谱法(HPLC) 20 （4）不加校正因子的主成分自身对照法 （5）峰面积归一化法 是以杂质峰总面积中所占比例不超过一定数值来限量 (二) 高效液相色谱法(HPLC) 21 1.内标法 适用于有对照品的杂质，能够测定杂质校正因子的情况需要内标物和杂质对照品. (二) 高效液相色谱法(HPLC) 22 内标法 将一个已知含量，样品中不含有的纯物质，加至待测样品溶液中，以此纯物质的量为标竿，对比测定待测组分的含量的方法谓内标法。优点：定量结果与进样量无关（不超载条件下）。 23 校正因子测定液——杂质对照品+内标 样品测定液——样品+同样量内标 分别进样，记录色谱图。 24 25 2.外标法测定法 适用于有对照品的杂质，而且进样量能够精确控制（以定量环或自动进样器进样)需要杂质对照品. 26 杂质对照品 样品 27 方法 配制杂质对照品溶液和供试品溶液，分别取一定量注入色谱仪，测定对照品的峰面积和供试品中杂质的峰面积，按外标法计算杂质的浓度。 28 3.加校正因子的主成分自身对照测定法 进行杂质检查时，不用杂质对照品 建立方法时，用杂质对照品 29 用pH7.0磷酸缓冲液：甲醇为溶剂， 制备浓度为4mg/mL的供试品溶液，将供试 品溶液定量稀释制成浓度为0.2mg/mL的溶 液作为对照溶液，HPLC测定，ODS柱，以磷 酸盐溶液：乙腈（40：60）为流动相，检 测波长215nm，取供试品溶液和对照溶 液各20μl，分别进样，记录色谱图 至主成分峰保留时间的3.5倍。红霉素B 和红霉素C按校正后的峰面积计算 （分别乘以校正因子0.7，1.0），均不 得大于对照溶液的主峰面积（5.0%） 红霉素B、红霉素C杂质的测定 30 4.不加校正因子的主成分自身对照法 用于没有杂质对照品时杂质的限量检查。前提是假定杂质与主成分的响应因子基本相同（杂质结构与响应主药结构相似） 31 方法： 首先制备供试品溶液（假定浓度为0.1 mg?ml-1）。取此液稀释成与杂质限度相当的浓度（浓度为1μg?ml-1）,作为对照溶液。取对照溶液调节检测灵敏度，取上述两种溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液各杂质峰面积，不得大于对照溶液主成分峰的峰面积。 杂质限量为？ 32 A杂质总=A1+A2+A3 A杂质总﹤A对 33 5 峰面积归一化法 用于粗略考察供试品中的杂质。 方法：取供试品溶液适量，进样，经HPLC分离，测定后，计算出各杂质峰面积及其总和占总峰面积[含药物的峰面积，不含溶剂峰面积（做空白试验确定）]的百分率，不得超过限量。