中华人民共和国国家标准GB 5413.25—2010食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中肌醇的测定National food safety standard Determination of inositol in foods for infants and young children, milk and milk products 2010-03-26发布2010-06-01实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发布 GB5413.25—2010前言本标准代替GB/T 5413.25-1997《婴幼儿配方食品和乳粉肌醇的测定》。本标准与GB/T 5413.25-1997相比，第一法主要变化如下：——对菌种保藏培养基进行了纠正；——试样处理由盐酸蒸馏法改为盐酸高压水解法；——菌种接种方式由菌液与培养基混合后分装试管改为菌液向试管中滴加法；——对标准工作溶液的浓度做了调整；——灭菌温度由100℃调整为121℃；——明确了控制接种菌悬液浓度的要求和方法；——提高了计算公式的适用性；——增加了检出限。第二法主要变化如下：——采用肌醇硅烷化衍生法；——增加了检出限。本标准的附录A和附录Ｂ为资料性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB 5413-1985、GB/T 5413.25-1997。I? GB5413.25—2010食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中肌醇的测定1范围本标准规定了婴幼儿食品和乳品中肌醇的测定方法。本标准适用于婴幼儿食品和乳品中肌醇的测定。2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。第一法 微生物法3原理利用葡萄汁酵母菌（Saccharomycesuvarum）对肌醇的特异性和灵敏性，定量测定出试样中待测物质的含量。在含有除待测物质以外所有营养成分的培养基中，微生物的生长与待测物质含量呈线性关系，根据透光率与标准工作曲线进行比较，即可计算出试样中待测物质的含量。4试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的二级水。4.14.24.34.44.5菌株：葡萄汁酵母菌（Saccharomyces uvarum），ATCC 9080。肌醇（myo-Inositol）标准品：分子式C6H12O6，纯度≥99 %。氯化钠（NaCl）。氢氧化钠（NaOH）。培养基4.5.14.5.2麦芽浸粉琼脂培养基（Malt Extract Agar）：参见附录 A。肌醇测定培养基：参见附录 A。4.6氯化钠溶液（9 g/L）：称取 9.0g氯化钠溶解于1000 mL水中，分装试管，每管10 mL。121℃灭菌 15 min。4.74.84.94.10盐酸（1 mol/L）：量取 82.0 mL盐酸溶于水中，冷却后定容至1000 mL。盐酸（0.44 mol/L）：量取 36.6 mL盐酸溶于水中，冷却后定容至1000 mL。氢氧化钠溶液（600 g/L）：称取 300 g氢氧化钠溶解于水中，冷却后定容至500 mL。氢氧化钠溶液（1 mol/L）：称取 40 g氢氧化钠溶解于水中，冷却后定容至1000 mL。1 GB5413.25—20104.11肌醇标准溶液4.11.1肌醇标准贮备液（0.2 mg/mL）：肌醇标准品置于装有五氧化二磷的干燥器中干燥 24 h以上，称取 50 mg肌醇标准品（4.2）（精确到0.1 mg），用水充分溶解，定容至 250 mL，贮存于冰箱中。4.11.2肌醇标准中间液（10μg/mL）：吸取 5 mL肌醇标准贮备液（4.11.1）用水定容到100mL，贮存于冰箱。4.11.3肌醇标准工作液（1 μg/mL和2 μg/mL）：吸取 10 mL肌醇标准中间液（4.11.2）两次，分别用水定容到 100 mL和50 mL。该工作液需每次临用前配制。4.124.13干燥剂：五氧化二磷（P2O5）。玻璃珠：直径约 5 mm。5仪器和设备除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：5.1天平：感量为 0.1 mg。5.2pH计：精度≤0.02。5.3分光光度计。5.4涡旋混合器。5.5离心机：转速≥2000转/分钟。恒温培养箱：30℃±1℃。5.65.7振荡培养箱：30℃±1℃，振荡速度140次/min～160次/min。冰箱：2℃～5℃。5.85.9无菌吸管：10 mL（具 0.1 mL刻度）或微量移液器或吸头。瓶口分液器：0 mL～10 mL。锥形瓶：200 mL。5.105.115.125.135.145.155.16容量瓶（A类）：100mL，250 mL，500 mL。单刻度移液管（A类）：容量5 mL。漏斗：直径 90 mm。定量滤纸：直径 90 mm。试管：18 mm ×180 mm。注：玻璃仪器使用前，用活性剂对硬玻璃测定管及其他必要的玻璃器皿进行清洗，清洗之后在 200℃干热2 h。6分析步骤6.1接种菌悬液的制备2 GB5413.25—20106.1.1菌种复苏将菌株（4.1）活化后接种到麦芽浸粉琼脂斜面培养基（4.5.1）上，30℃±1℃培养 16 h～24 h后，再转接 2代～3代来增强活力，制成贮备菌种，贮于冰箱（8.5）中，保存期不要超过 2周。临用前接种到新的麦芽浸粉琼脂斜面培养基上。6.1.2接种菌悬液的制备在使用的前一天将贮备菌种转接到新配制的麦芽浸粉琼脂斜面培养基上，于30℃±1℃培养16h～24 h。用接种环刮取菌苔到一支灭菌氯化钠溶液（4.6）试管中。以 2000转/分钟离心 2 min～3 min，倾出上清液，加入 10 mL氯化钠溶液（4.6），振荡混匀，再离心2 min～3 min，如此清洗 3次～4次。吸取一定量的该菌液移入装有 10 mL氯化钠溶液（4.6）的试管中，制成接种菌悬液。用分光光度计，以氯化钠溶液（4.6）作空白，550nm波长下测定该接种菌悬液的透光率，调整加入的菌液量或者加入一定量的氯化钠溶液使该菌悬液透光率在 6