中华人民共和国国家标准GB 5413.11—2010食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素 B1的测定 National food safety standard Determination of vitamin B1 in foods for infants and young children, milk and milk products 2010-03-26发布2010-06-01实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发布 GB5413.11—2010前言本标准代替GB/T 5413.11-1997《婴幼儿配方食品和乳粉维生素B1的测定》。本标准与GB/T 5413.11-1997相比，主要变化如下：——标准名称改为《婴幼儿食品和乳品中维生素B1的测定》；——取消了原标准第一法（荧光分光光度法）；——对原标准的结构进行了修改；——外标法定量采用多点标准曲线法；——在结果计算时明确样品中维生素B1含量以硫胺素计；——增加附录A标样的液相色谱图。本标准附录A为资料性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB 5413-1985、GB/T 5413.11-1997。I? GB5413.11—2010食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素 B1的测定1 范围本标准规定了婴幼儿食品和乳品中维生素B1的测定方法。本标准适用于婴幼儿食品和乳品中维生素B1的测定。2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。3原理样品在稀盐酸环境中恒温水解，酶解，样液用碱性铁氰化钾衍生，正丁醇（或异丁醇）萃取后，经C18反相色谱柱分离，用荧光检测器（Ex：375nm，Em：435 nm）检测，外标法定量。4试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的一级水。4.14.24.34.44.54.64.74.84.9正丁醇或异丁醇。铁氰化钾。氢氧化钠。浓盐酸。三水乙酸钠。冰乙酸。甲醇：色谱纯。维生素 B1标准品：硫胺素盐酸盐或硫胺素硝酸盐，纯度≥99%。铁氰化钾溶液（20 g/L）：称取 2 g铁氰化钾（4.2），用水溶解并定容至100 mL。临用前配制。4.10氢氧化钠溶液（100 g/L）：称取 25 g氢氧化钠（4.3），用水溶解并定容至 250 mL。4.11碱性铁氰化钾溶液：将 5 mL铁氰化钾溶液（4.9）与200 mL氢氧化钠溶液（4.10）混合。临用前配制。4.12盐酸（0.1 mol/L）：吸取 9 mL浓盐酸（4.4），溶于1000 mL水中。4.13盐酸（0.01 mol/L）：吸取 0.1 mol/L盐酸（4.12）50 mL，用水稀释并定容至 500 mL。1 GB5413.11—20104.14 乙酸钠溶液（0.05 mol/L）：称取 6.80g 三水乙酸钠（4.5），加 900 mL水溶解，用冰乙酸（4.6）调 pH值至4.0～5.0，定容至1000 mL。经 0.45 μm微孔滤膜过滤。4.15 乙酸钠溶液（2.0 mol/L）：称取27.22 g 三水乙酸钠（4.5），用水溶解并定容至 100 mL。4.16 混合酶溶液，称取 2.345 g木瓜蛋白酶（活力单位≥600 U/g）、1.175 g淀粉酶（活力单位≥4000U/g），用水溶解并定容至 50 mL。临用前配制。4.17标准溶液4.17.1维生素B1 标准储备液（500 μg/mL）：称取相当于硫胺素 50 mg（精确至 0.1 mg）的维生素B1标准品（4.8），用0.01 mol/L 盐酸（4.13）溶解并定容于 100 mL。置于 0℃～4℃冰箱中，保存期为3个月。4.17.2维生素B1 标准中间液：准确吸取 2.00 mL标准储备液（4.17.1），用水稀释并定容至 100 mL，此溶液中维生素B1浓度为 10 μg/mL。临用前配制。4.17.3维生素B1 标准工作液：分别吸取维生素B1 标准中间液（4.17.2）0 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、5.00 mL、10.00 mL，用水溶解并定容至 100 mL。该标准系列浓度分别为 0 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.20 μg/mL、0.5 μg/mL、1.00 μg/mL。临用前配制。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪，带有荧光检测器。5.2高压灭菌锅。5.3 离心机：转速≥4000 转/分钟。5.4 pH计：精度0.01。5.5 组织捣碎机（转速在0转/分钟～12000转/分钟可调）。5.6 0.45 μm微孔有机滤膜。5.7 天平：感量为0.001g和0.0001g。6分析步骤6.1 试样的处理6.1.1试液提取称取5 g～10 g（精确至0.01 g）试样（如有必要，将试样放入捣碎机中捣碎；试样中含维生素B1 5 μg以上）于100 mL三角瓶中，加60 mL 0.1 mol/L盐酸（4.12），充分摇匀，用棉花塞和牛皮纸封口，放入高压灭菌锅内，在121 ℃下保持30 min，待冷却至40 ℃以下后取出，轻摇数次；用2.0 mol/L乙酸钠溶液（4.15）调pH 值至4.0 左右，加入2.0mL（可根据酶活力不同适当调整用量）混合酶液（4.16），摇匀后，置于37 ℃的培养箱中过夜；将酶解液转移至100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，滤纸过滤，取滤液备用。6.1.2试液衍生化取上述滤液10.00 mL于 25 mL具塞比色管中，加入5 mL 碱性铁氰化钾（4.11），充分混匀后，加10.00mL 正丁醇（或异丁醇）（4.1），强烈振荡后静置约 10 min，充分分层，吸取正丁醇（或异丁醇）相（上层）于 4000 转/分钟～6000 转/分钟离心 5 min，取上清液经有机微孔滤膜过滤（5.6），供进样用。2 GB5413.11—2010另取 10.00 mL标准工作液（4.17.3），与试液同步进行衍生化。注1：