中华人民共和国国家标准GB 5413.15—2010食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中烟酸和烟酰胺的测定National food safety standard Determination of vitamin niacin and niacinamide in foods for infants and young children,milk and milk products 2010-03-26发布2010-06-01实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发布 GB5413.15—2010前言本标准第二法等同采用国际分析家学会（AOAC）944.13 Niacin and Niacinamide(Nicotinic Acid andNicotinamide) in Vitamin Preparations。本标准代替GB/T 5413.15-1997《婴幼儿配方食品和乳粉烟酸和烟酰胺的测定》。本标准第二法与GB 5413.15-1997相比，主要变化如下：——增加了光密度法测定；——增加了淀粉类试样的测定；——增加标准曲线绘制的文字描述。本标准附录 A为资料性附录。本标准代替标准的历次版本发布情况为：——GB 5413-1985、GB/T 5413.15-1997。I? GB5413.15—2010食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中烟酸和烟酰胺的测定1范围本标准规定了婴幼儿食品和乳品中烟酸和烟酰胺的测定方法。本标准适用于婴幼儿食品和乳品中烟酸和烟酰胺的测定。2规范性引用性文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。第一法 高效液相色谱法3原理试样经热水提取、酸性沉淀蛋白质后，以 C184试剂和材料色谱柱分离，用紫外检测器定量。除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。4.14.24.34.44.54.64.74.84.9淀粉酶：酶活力≥1.5 U/mg。盐酸。氢氧化钠。盐酸(2.4 mol/L)：准确移取 10 mL盐酸（4.2）于 50 mL容量瓶中，用水定容。氢氧化钠溶液（2.5 mol/L）：称取 5.0g氢氧化钠（4.3）于50 mL容量瓶中，用水定容。高氯酸（HClO4）：体积分数为 60%。甲醇（CH4O）：色谱纯。异丙醇(C3H8O)：色谱纯。庚烷磺酸钠(C7H15NaO3S)：优级纯。4.10标准溶液4.10.1烟酸及烟酰胺标准储备液（1.0 mg/mL）：称取烟酸及烟酰胺标准品各 0.1 g（精确到 0.0001 g），分别置于 100 mL容量瓶中，用水溶解定容。4.10.2烟酸及烟酰胺混合标准中间液（40 μg/mL）：分别准确吸取烟酸及烟酰胺标准储备液（4.10.1）2 mL至50 mL定量瓶中，用水定容。临用前配制。1 GB5413.15—20104.10.3烟酸及烟酰胺混合标准系列测定液：分别准确吸取烟酸及烟酰胺混合标准中间液（4.10.2）0.0mL、1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、10.0 mL，至 50 mL容量瓶中用水定容。该标准系列浓度分别为0.00 μg/mL、0.80 μg/mL、1.60 μg/mL、4.00 μg/mL、8.00 μg/mL。临用前配制。5仪器和设备5.15.25.35.45.5高效液相色谱仪，带紫外检测器。pH计：精度为0.01。超声波振荡器。天平：感量为 0.1 mg。培养箱：30℃～80℃。6分析步骤6.1试样的预处理6.1.1含淀粉的试样：称取混合均匀固体试样约 5.0 g（精确到 0.0001 g）加入约25 mL 45℃～50℃的水，或称取混合均匀液体试样约 20.0 g（精确到 0.0001 g）于 150 mL锥形瓶中，再加入约0.5 g淀粉酶（4.1），摇匀后向锥形瓶中充氮，盖上瓶塞，置于 50℃～60℃的培养箱内培养约30min，取出冷却至室温。6.1.2不含淀粉的试样：称取混合均匀固体试样约 5.0 g（精确到 0.0001 g）加入约 25 mL 45℃～50℃的水，或称取混合均匀液体试样约 20.0 g（精确到 0.0001 g）于 150 mL锥形瓶中，振摇，静置5 min～10 min，充分溶解，并冷却至室温。6.1.36.1.4提取：将上述锥形瓶置于超声波振荡器中振荡约 10 min。沉淀及定容：待试样溶液降至室温后，用盐酸（4.4）调节试样溶液的 pH值至1.7 ±0.1，放置约2 min后，再用氢氧化钠溶液（4.5）调节试样溶液的pH值至4.5±0.1。将试样溶液转至 50 mL容量瓶中，用水反复冲洗锥形瓶，洗液合并于 50mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀后经滤纸过滤，滤液再经 0.45 μm微孔滤膜加压过滤，用试管收集，即为试样待测液。6.2参考色谱条件色谱柱：C18柱（粒径5μm，150mm ×4.6 mm）或具有同等性能的色谱柱。流动相：甲醇（4.7）70 mL，异丙醇（4.8）20 mL，庚烷磺酸钠（4.9）1 g，用910mL水溶解并混匀后，用高氯酸（4.6）调pH至2.1 ± 0.1，经0.45 μm膜过滤。流速：1.0 mL/min。检测波长：261 nm。柱温：25℃。进样量：10 μL。6.3定量分析6.3.1 标准曲线绘制将烟酸及烟酰胺混合标准系列测定液（4.10.3）依次进行色谱测定（其标准样品色谱图参见附录A中图 A.1.1）。记录各组分的色谱峰面积或峰高，以峰面积或峰高为纵坐标，以标准测定液的浓度为横坐标，绘制标准曲线。2 GB5413.15—20106.3.2 试样测定将试样待测液（6.1.4）进行色谱测定。记录各组分色谱峰面积或峰高，根据标准曲线计算出试样待测液中烟酸及烟酰胺各组分的浓度 ci。7分析结果的表述7.1 试样中烟酸或烟酰胺含量的计算试样中烟酸或烟酰胺的含量按（1）式计算：ci ×V ×100………………………………………………………………（1）X 1或2=m式中：X1 或 2——试样中烟酸或烟酰胺的含量，单位为微克每百克（μg/