中华人民共和国国家标准GB 4789.3—2010食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数 National food safety standard Food microbiological examination: Enumeration of coliforms 2010-03-26发布2010-06-01实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发布 GB4789.3—2010前言本标准代替GB/T 4789.3-2008《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》。本标准与GB/T 4789.3-2008相比，主要修改如下：——修改了标准的中英文名称；——“第二法大肠菌群平板计数法”的平板菌落数的选择范围修改为“15 CFU～150 CFU”；——删除了“第三法大肠菌群PetrifilmTM本标准的附录A、附录B为规范性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：测试片法”。——GB 4789.3-1984、GB 4789.3-1994、GB /T 4789.3-2003、GB /T 4789.3-2008。I? GB4789.3—2010食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数1范围本标准规定了食品中大肠菌群（Coliforms）计数的方法。本标准适用于食品中大肠菌群的计数。2术语和定义2.1大肠菌群coliforms在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。2.2最可能数most probable number，MPN基于泊松分布的一种间接计数方法。3设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1恒温培养箱：36℃±1℃。3.2冰箱：2℃～5℃。3.3恒温水浴箱：46℃±1℃。3.4天平：感量 0.1 g。3.5均质器。3.6振荡器。3.7无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL刻度）、10mL（具 0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头。3.8无菌锥形瓶：容量 500 mL。3.9无菌培养皿：直径 90 mm。3.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。3.11菌落计数器。4培养基和试剂4.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉汤：见附录 A中A.1。1 GB4789.3—20104.24.34.44.54.64.7煌绿乳糖胆盐（Brilliant Green Lactose Bile，BGLB）肉汤：见附录 A中A.2。结晶紫中性红胆盐琼脂（Violet Red Bile Agar，VRBA）：见附录 A中A.3。磷酸盐缓冲液：见附录 A中A.4。无菌生理盐水：见附录 A中A.5。无菌 1 mol/L NaOH：见附录 A中A.6。无菌 1 mol/L HCl：见附录 A中A.7。2 GB4789.3—2010第一法 大肠菌群MPN计数法5检验程序大肠菌群MPN计数的检验程序见图1。检 样25 g(mL)样品+225 mL稀释液，均质10倍系列稀释选择适宜 3个连续稀释度的样品匀液，接种LST肉汤管36℃±1℃ 48h±2h不产气产 气BGLB肉汤36℃±1℃48 h±2 h不产气产 气大肠菌群阴性大肠菌群阳性查 MPN表报告结果图1大肠菌群 MPN计数法检验程序6操作步骤6.1样品的稀释6.1.1固体和半固体样品：称取 25 g样品,放入盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000 r/min～10000 r/min均质1 min～2 min,或放入盛有 225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min，制成 1:10的样品匀液。6.1.2液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10的样品匀液。6.1.3样品匀液的 pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1 mol/L NaOH或1 mol/L HCl调节。3