ICS65.120 DB13 B 46 河北省地方标准 DB13/T 1384.7—2011 饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺 氟沙星的测定 Determination of enrofloxacin/ciprofloxacin/norfloxacin in feed 2011-05-10发布 2011-05-20实施 河北省质量技术监督局发 布  DB13/T1384.7—2011 前言 本标准按照GB/T1.1－2009给出的规则起草。 本标准由河北省质量技术监督局提出。 本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、河北省医科大学、北京出入境检验检疫局技术 中心、石家庄市疾病预防控制中心、河北省饲料产品质量监督检验站。 本标准主要起草人：张岩、李挥、吕品、丛斌、卢小宇、张宏、范斌、贾茜、马春玲、米振杰、杨 立学、李志平、沈磊、高振同、武英利。 I  DB13/T1384.7—2011 饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星的测定 1范围 本标准规定了饲料中恩诺沙星，环丙沙星，诺氟沙星的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于饲料中恩诺沙星，环丙沙星，诺氟沙星的测定。 本标准的方法检出限为10.0μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规则和试验方法（GB/T 6682－2008，ISO 3696:1987,MOD）。 3方法提要 试样加入内标后，氢氧化钠溶液提取，离子化的喹诺酮类药物经过阴离子交换固相萃取柱富集净化， 用液相色谱-质谱/质谱法测定，梯度洗脱，内标法定量。 4试剂与材料 除特别注明外，均为分析纯试剂；水为符合 GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：HPLC级。 4.2氢氧化钠。 4.3甲酸（85％）。 4.4阴离子交换柱（PAX）：60mg，3mL，或相当者。 4.5同位素内标：氘代诺氟沙星，纯度≥98％。 4.6恩诺沙星、环丙沙星和诺氟沙星标准品：纯度≥99％。 4.7恩诺沙星、环丙沙星和诺氟沙星标准储备溶液：1mg/mL。准确称取适量的恩诺沙星、环丙沙星 和诺氟沙星标准品，甲醇配成1.0 mg/mL的标准储备液。储备液储备在4℃冰箱中，可保存6个月。 4.8恩诺沙星、环丙沙星和诺氟沙星标准工作溶液：用甲醇－水（2＋8，体积比）分别配成浓度范围 为1 ng/mL～60ng/mL标准工作溶液，其中内标溶液浓度为50ng/mL，现配。 4.9氘代诺氟沙星（NOR－D5） 内标储备溶液：100μg/mL。称取适量的 NOR－D5内标物（4.5）， 用甲醇（4.1）配成100μg/mL储备液，储备液储存在4℃冰箱中。 4.10氘代诺氟沙星（NOR－D5 ） 内标储备溶液：1 μg/mL。取适量的内标储备液（4.8），用甲醇 （4.1）稀释成100 μg/mL储备液，内标工作溶液在4℃下保存。 4.11氢氧化钠溶液（0.1mol/L）：取4 g氢氧化钠，溶解于1L水中。 4.12甲酸-甲醇溶液（5＋95，体积比）：取5 mL甲酸（4.3）于80mL水中，混合均匀。 1  DB13/T1384.7—2011 5仪器和设备 5.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾粒子源。 5.2分析天平：感量0.001 g，0.1mg，各一台。 5.3旋转蒸发仪。 5.4固相萃取装置。 5.5涡旋均混器。 5.6真空泵：真空度不低于80 kPa。 5.7滤膜：有机系，0.45μm。 5.8离心管：100mL，具塞。 6试样的制备 6.1提取 准确称取5 g样品（精确至0.01 g），置于100 mL离心管中，加经灼烧的无水硫酸钠，用干净玻 璃棒将样品与无水硫酸钠搅拌分散均匀，准确加入1μg/mL内标溶液50μL，加入20 mL氢氧化钠溶 液，于涡旋均匀器上快速混匀。以5 000r/min的速度离心5 min，上清液移入125mL分液漏斗中，加 20 mL正己烷混合，涡漩振荡，静置分层，取下层水相待净化。 6.2净化 依次用3mL甲醇和3mL水活化固相萃取柱，将样品溶液转移到小柱上，依次用水、甲醇淋洗， 弃去上述滤液。用甲酸-甲醇溶液3mL洗脱。40℃水浴旋转蒸发至干，用甲醇-水定容1.0 mL,过0.45 μm的滤膜到进样瓶中，供液相色谱-质谱仪测定。 7测定步骤 7.1测定 7.1.1参考液相色谱条件 色谱柱：C18 ，3 μm，150 mm×2.0 mm(内径)或相当者。 流动相：甲醇（A）+0.1%甲酸水溶液（B）。 流速：0.20mL/min。 梯度洗脱程序：参见表1。 柱温：室温。 进样量：25 μL。 2