ICS65.120 DB13 B 46 河北省地方标准 DB13/T 1384.2—2011 饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定 Determination of strain/tetracycline/ aureomycin in feed 2011-05-10发布 2011-05-20实施 河北省质量技术监督局发 布  DB13/T 1384.2—2011 前言 本标准按照GB/T 1.1－2009给出的规则起草。 本标准由河北省质量技术监督局提出。 本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、石家庄市疾病预防控制中心、河北医科大学、 北京出入境检验检疫技术中心、河北省饲料产品质量监督检验站。 本标准主要起草人：张岩、张宏、李挥、丛斌、杨立学、卢晓宇、吕品、沈磊、米振杰、贾茜、李 志平、马春玲、张敬轩、高振同、武英利。 I  DB13/T 1384.2—2011 饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定 1范围 本标准规定了饲料中土霉素、四环素、金霉素的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定。 本标准的方法检出限：50μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T 6682－1992，neq IS03696：1987） 3原理 试样提取液经离心后，上清液用 OasisHLB固相萃取柱和阴离子交换柱净化，液相色谱-串联质谱 仪测定，外标法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的一级水。 4.1甲醇：色谱纯。 4.2乙腈：色谱纯。 4.3盐酸。 4.40.4mol/L盐酸溶液：准确量取32.8mL盐酸于1000mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。 4.5草酸。 4.60.01mol/L草酸甲醇溶液：准确称取草酸1.26g，用甲醇溶解并定容于1 000 mL容量瓶 中。 4.7甲酸。 4.8甲酸溶液：准确量取4 mL甲酸于1000mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀即可。 4.9土霉素、四环素、金霉素标准物质：纯度≥95％。 4.10土霉素、四环素、金霉素标准储备溶液：0.1mg/mL。准确称取适量的土霉素、四环素、 金霉素、标准物质，分别用甲醇配成0.1 mg/mL的标准储备液。储备液贮存在-18℃冰柜中。 4.11土霉素、四环素、金霉素基质混合标准工作溶液：根据需要吸取适量土霉素、四环素、金 霉素标准储备溶液，用空白样品提取液稀释成适当浓度的基质混合标准工作溶液，基质混合标准 工作溶液在4℃保存，可使用三天。 4.12 Oasis HLB固相萃取柱或相当者：500 mg，6mL。使用前分别用5 mL甲醇和10mL水 预处理，保持柱体湿润。 1  DB13/T 1384.2—2011 5仪器 5.1液相色谱-串联四级杆质谱仪，配有电喷雾离子源。 5.2分析天平：感量0.l mg和lmg各一台。 5.3旋涡混匀器。 5.4固相萃取仪。 5.5高速离心机。 5.6具塞锥形瓶：50mL。 5.7离心管：50mL，5 mL。 5.8氮吹仪。 5.9旋转蒸发器。 6试样的制备 6.1提取 准确称取3.0 g样品（准确至0.01 g），置于50 mL具塞锥形瓶中，加入甲醇10 mL，旋涡混匀1 min， 加入盐酸溶液（4.4）30mL，旋涡混匀1 min，超声20min，移至50 mL离心管中，5 000 r /min离心10 min，取上清液，待净化。 6.2净化 取10 mL上清液与40 mL水稀释混匀，再移入下接OasisHLB柱的贮液器中。溶液以小于1.0mL /min 的流速过柱，然后依次用甲醇-水溶液（4.9）淋洗，减压抽干20 min。用草酸甲醇溶液（4.6）5mL洗 脱，收集洗脱液于40℃减压旋转蒸发至干,用1.0 mL 流动相溶解残渣，12000r /min离心10 min，经0.45 μm有机滤膜过滤后，待测。 7测定步骤 7.1测定 7.1.1液相色谱条件 色谱柱：Inertsil C8，3.5μm，150mm×2.1 mm（i.d）或相当者； 流动相：乙腈＋甲醇＋0.4％甲酸溶液（18＋4＋78）； 流速：0.2 mL/mim； 柱温：25℃； 进样量：20μL。 7.1.2质谱条件 离子源：电喷雾离子源； 扫描方式：正离子扫描； 检测方式：多反应监测； 电喷雾电压、碰撞电压等条件优化至最佳值； 定性离子对、定量离子对见表1。 2  DB13/T 1384.2—2011 表1三种四环素族抗生素定性离子对、定量离子对 土霉素 四环素 金霉素 461/426 461/443 461/381 445/410 445/154 445/428 479/444 479/154 479/462 定性离子对/（m/z） 定量离子对/ m/z） 461/426 445/410 479/444 7.1.3液相色谱-串联质谱测定 用土霉素、四环素、金霉素基质混合标准工作溶液分别进样，以峰面积为纵坐标，工作溶液溶度为 横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中土霉素、四环素、金霉素的响 应值均应在仪器测定的线性范围内。土霉素、四环素、金霉素标准总离子流图见附录 A。 7.2平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。 7.3空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤同时完成空白试验。 8结果计算 结果按式（1）计算： V1000 X = c?? m 1000 ............... ........... ................... (1) 式中： X——试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； C——从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V——样品溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）； M——样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克（g）。 注：计算结果应扣除空白值。 9精密度 在重复性条件下获得的两次