ICS 11 ICS 11 DB22 吉 林省地 方标准 DB 22/ T 3074—2019 呼吸道常见病原菌检测-微流控芯片法 Microfluidic chip method for detecting common pathogens of respiratory tract 2019-12-25发布 2020-02-01实施 吉林省市场监督管理厅 发布 本标准仅供内部使用 本标准仅供内部使用 印 本标准仅供内部使用 不得翻 印 前 言 前 言 DB22/T 3074 —2019 本标准仅供内部使用 本标准仅供内部使用 印 本标准仅供内部使用 不得翻 印 DB22/T 3074 —2019 呼吸道常见病原菌检测-微流控芯片法 范围 本标准规定了呼吸道常见病原菌微流控芯片检测的原理、生物安全要求、材料与试剂、样本、检测、 数据处理、质量控制、结果判定与表述、检测报告、废弃物处理与防止污染的措施。 本标准适用于呼吸道肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假 单胞菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、流感嗜血杆菌的微流控芯片检测。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室生物安全通用要求 WS/T 230-2002临床诊断中聚合酶链式反应（ PCR）技术的应用 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 微流控芯片 Microfluidic chip 检测样本在一个小的实验装置中连续完成样本核酸提娶纯化、扩增等过程，该装置也被称为芯片 实验室（Lab on a Chip）。芯片上包含各种微管道、微腔室等，尺寸通常在微米级，所操作的流体通 常在微升或纳升级，具有样本及试剂消耗少的特点。 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 PBS：磷酸盐缓冲液（phosphate buffer solution）。 LAMP：环介导恒温扩增法（Loop mediated Isothermal Amplification）。 Spn：肺炎链球菌（Streptococcus Pneumoniae）。 Sau：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus Aureus）。 Mrs：耐甲氧西林葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus）。 Kpn：肺炎克雷伯菌（Klebsiella Pneumoniae）。 Pae：铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。 Aba：鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）。 Sma：嗜麦芽窄食单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）。 Hin：流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae）。 DB22/T 3074—2019 5 原理 DB22/T 3074—2019 5 原理 在微流控芯片上，利用荧光染料掺入法在恒温扩增微流控芯片核酸分析仪上进行恒温（65 ℃）反 应和实时荧光分析，在具有链置换功能的聚合酶作用下，扩增阳性的样品会产生类似“S”形扩增曲线 一步完成对靶基因的扩增和检测。 生物安全要求 采样及检测过程所涉及的实验操作应按 GB 19489 规定执行。 7 材料与试剂 仪器与耗材 II级生物安全柜。 涡旋混合仪。 金属浴或水浴锅。 高压灭菌器。 微量移液器：10 μL、100 μL、200 μL、1000 μL。 微量带滤芯吸头：10 μL、100 μL、200 μL、1000 μL。 医用冰箱：2 ℃～8 ℃、-20 ℃、-80 ℃。 低温高速离心机，最高离心力达 15 000 r/min以上。 低速离心机，最高离心力达 1 000 r/min以上。 恒温扩增微流控芯片核酸分析仪。 核酸快速提取仪。 7.1.10 7.1.11 7.1.12芯片封口膜。 7.1.13微流控芯片。 7.1.14离心管：200 μL、1.5 mL、15 mL。 7.2