ICS 07.100.10 ICS 07.100.10 DB22 吉 林省地 方标准 DB 22/T 243—2019 代替 DB 22/T 243-2000 霍乱弧菌检测 气相色谱-质谱法 Method of Vibrio cholera With Gas chromatography-mass spectrometry 2019-10-14发布 2019-11-01实施 吉林省市场监督管理厅 发布 本标准仅供内部使用 本标准仅供内部使用 印 本标准仅供内部使用 不得翻 印 DB22/T 243—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009 和GB/T 20001.4-2015给出的规则修订。 本标准代替 DB22/T 243-2000《气相色谱-质谱检测霍乱弧菌的方法》。与 DB22/T 243-2000相比， 除编辑性修改外主要技术变化如下： ――修改标准名称为《霍乱弧菌检测气相色谱 -质谱法》； ――在“规范性引用文件”中，增加了GB/T 6682和 GB 19489（见2）；删除了GB 15984-1995 ； ――增加了“原理”（见3）； ――修改了“试剂和材料”（见4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6，2000年版的 3）； ――增加了“标准菌株”（见4.11）； ――增加了“材料”（见4.17）； ――增加了“恒温培养箱”（见5.9）； ――增加了“Ⅱ级生物安全柜”（见5.10）； ――增加了“样品分离培养方法”（见6.1）； ――修改了“色谱条件”（见7.3.1， 2000年版的 4.1）； ――修改了“进样方式”（见7.3.1.6， 2000年版的 5.3）； ――增加了“质量保证”（见9）； ――增加了“废弃物的处理”（见10）； ――增加了“试验报告”（见11）。 本标准由吉林省卫生健康委员会提出并归口。 本标准修订单位：吉林省疾病预防控制中心。 本标准主要修订人：杨修军、张炜煜、崔勇、张立夫、姚佳彤。 本标准的历次版本发布情况为： ——DB22/T 243-2000。 本标准仅供内部使用 本标准仅供内部使用 印 本标准仅供内部使用 不得翻 印 DB22/T 243—2019 霍乱弧菌检测 气相色谱-质谱法 警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验，本标准并未指出所有可能的安全问 题，使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。 范围 本标准规定了霍乱弧菌气相色谱-质谱检验方法。 本标准适用于病例样本和环境样本中霍乱弧菌的检测。 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 2 规范性引用文件 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室生物安全通用要求 原理 气相色谱是一种以气体为流动相，采用冲洗法的柱色谱分离技术，并与适当的鉴定手段相结合的一 种分析方法。不同菌属或同属不同血清型细菌全细胞脂肪酸组成成分不同，它们有各自不同的色谱-质 谱指纹图，根据峰值不同进行判断。根据霍乱弧菌种共有特异性峰值判断可检出羟基十四烷酸甲酯 （C15H30O3）、油酸甲酯（C18H34O2）、亚油酸甲酯（C18H32O2）和异硬酯酸甲酯（C19H38O2）。霍乱 弧菌埃尔托生物型稻叶血清型菌株细胞脂肪酸---十六烯酸甲酯（C17H32O2）进行霍乱弧菌埃尔托生物 型稻叶血清型和埃尔托生物型小川血清型区别。 试剂和材料 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2 氢氧化钾：色谱纯。 4.3 正庚烷：色谱纯。 4.4 氯化钠：色谱纯。 4.5 无水硫酸钠：色谱纯。 4.6 石油醚：色谱纯（60 ℃～90 ℃）。 4.7 甲醇-甲苯-硫酸溶液（30+15+1） 4.8 三氟化硼-甲醇溶液（15+85）。 4.9 氦气。 4.10生理盐水。 除另有规定外，所有试剂均为分析纯。实验室用水符合GB/T 6682中一级水的要求。 DB22/T 243—2019 DB22/T 243—2019 11标准菌株: a) b) 埃尔托生物型小川血清型 CMCC18514；