附件食品中那非类物质的测定（BJS 201805）1范围本标准规定了食品（含保健食品）基质中 90种那非类物质的超高效液相色谱-串联质谱测定方法。标准中方法一超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法，适用于饮料、果冻、蛋白粉、牡蛎粉、饼干、糖果、酒类及咖啡等食品（含与上述基质相同的保健食品及片剂、胶囊、软胶囊等剂型）中 90种那非类物质的定性和定量测定。标准中方法二超高效液相色谱-串联高分辨质谱法，适用于饮料、果冻、蛋白粉、牡蛎粉、饼干、糖果、酒类及咖啡等食品（含与上述基质相同的保健食品及片剂、胶囊、软胶囊等剂型）中90种那非类物质的筛查和定性确证。方法一超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法2原理试样经甲醇超声提取，过滤后，滤液供超高效液相色谱—三重四极杆串联质谱仪测定，外标法定量。3试剂和材料注：水为 GB/T 6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1甲醇（CH3OH）：质谱级。3.1.2甲酸（HCOOH）：质谱级。3.1.3乙酸乙酯（C4H8O2）：分析纯。3.1.4盐酸（HCl）：分析纯。3.2试剂配制3.2.1 0.1%甲酸水溶液：取甲酸 1mL用水稀释至1000mL，用滤膜（4.3）过滤后备用。3.2.2盐酸甲醇溶液（1+99）：取盐酸 1mL用甲醇稀释至100mL。3.2.3甲醇水溶液（1+1）：将甲醇与水等体积混合。3.3标准品西地那非等90种物质标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录 A表A.1，纯度≥98%。3.4标准溶液配制—1——3.4.1标准储备液（200μg/mL）：分别精密称取 Lodenafil carbonate（46罗地那非碳酸酯）、Sildenafildimer impurity（63西地那非二聚体杂质）、Vardenafildimer（69伐地那非二聚体）标准品（3.3）各 10mg，用盐酸甲醇溶液（1+99）溶解并稀释至50mL，摇匀；分别精密称取其余 87种标准品（3.3）各 10 mg，用甲醇溶解并稀释至50mL，摇匀，制成浓度为 200 μg/mL标准储备液。-20℃避光贮存，有效期 3个月。3.4.2混合标准中间工作溶液（1 μg/mL）：分别准确吸取标准储备液（200 μg/mL）（3.4.1）各 0.1 mL，用甲醇稀释至 20mL，摇匀，制成 1 μg/mL的混合标准工作溶液。临用新制。根据化合物保留时间适当分组。3.4.3混合标准工作溶液：分别准确吸取混合标准中间工作液（1 μg/mL）（3.4.2）适量，用甲醇水溶液（1+1）（3.2.3）稀释，摇匀，作为系列混合标准工作溶液，浓度依次为各化合物 2 μg/L、5 μg/L、10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L，临用新制或依仪器响应情况配制适当浓度的混合标准工作溶液。或根据需要采用空白基质提取液（5.1.4），配制适当浓度的基质混合标准工作溶液。4仪器和设备4.1高效液相色谱-串联质谱仪，配电喷雾（ESI）离子源。4.2天平：感量分别为0.01 mg和0.1mg。4.3微孔滤膜：0.22μm，有机相型。4.4离心机：转速 ≥4 000r/min。4.5超声波清洗器。5分析步骤5.1试样制备5.1.1固态或半固态试样取固态试样（蛋白粉、牡蛎粉、饼干、糖果、咖啡及含与上述基质相同的保健食品及片剂、胶囊等剂型）适量混匀，研细，或取半固态试样（果冻）适量混匀，精密称取 1g（精确至 0.001 g）置于 50 mL容量瓶中，加甲醇（3.1.1）适量，超声提取15 min，放冷至室温，用甲醇（3.1.1）定容，转移至 50 mL离心管中，4000 r/min离心5 min，上清液经微孔滤膜过滤（4.3），取续滤液，根据实际浓度用甲醇水溶液（1+1）（3.2.3）适当稀释至线性范围内，备用。5.1.2液态试样取试样（饮料、酒）适量摇匀，准确吸取 1mL置于50 mL容量瓶中，加甲醇（3.1.1）适量，超声提取 15 min，放冷至室温，用甲醇（3.1.1）定容，经微孔滤膜（4.3）过滤，取续滤液，根据实际浓度用甲醇水溶液（1+1）（3.2.3）适当稀释至线性范围内，备用。5.1.3油脂基质（软胶囊）试样取试样（软胶囊）适量混匀，精密称取 1g（精确至 0.001g）置于 50mL容量瓶中，加乙酸—2——乙酯 5mL，振摇，使其分散，加甲醇（3.1.1）适量，超声提取 15 min，放冷至室温，用甲醇（3.1