ICS65.120 DB34 B 46 安徽省地方标准 DB 34/T 1377—2011 尿液中莱克多巴胺的残留测定 —胶体金免疫层析法 Determination of Ractopamine in Urine colloidal gold 2011-03-16发布 2011-04-16实施 安徽省质量技术监督局发 布   DB34/T 1377—2011 前言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省畜牧兽医局提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。 本标准主要起草人：汤春莲、许世富、陈文帮、丁作坤、陶小平、李珲。 I   DB34/T 1377—2011 尿液中莱克多巴胺的残留测定—胶体金免疫层析法 1范围 本标准规定了用胶体金免疫层析法检测猪、牛尿液中残留的莱克多巴胺。 本标准适用于猪、牛尿液中莱克多巴胺的残留快速检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 3试样制备 采集的尿液应保存于-18℃ 的冰柜中，用前恢复至室温，备用。 4原理 将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的 毛细管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移。在移动的过程中，会发生相应的抗原抗体反应， 并通过免疫金的颜色而显示出来。样本中的莱克多巴胺在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗 体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜检测线上莱克多巴胺－BSA偶联物的结合，使检测线不显颜 色，结果为阳牲；反之，检测线显红色，结果为阴性。 5试剂和材料 5.1除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水符合 GB/T 6682 二级水的规定。 5.2胶体金免疫层析快速检测装置组成 5.2.1莱克多巴胺全抗原的偶联率为 1：10～1：20 （ BSA：CL）。 5.2.2抗莱克多巴胺抗体、多抗或单抗。多抗可以由兔或羊血清获得，效价应大于5000（间接ELISA 法），或有效抗体含量应大于 0.05mg/mL；特异性应大于5000（间接抑制ELISA法）。单抗由鼠腹水 获得，效价应大于15000（间接ELISA法），或有效扰体含量应大于0.5 mg/mL；特异性应大于5000 （间接抑制ELISA法）。抗体相对亲和力为3.56×109（结合率下降50％ 时，相对应的抗体浓度的例 数）。 5.2.3样品垫：玻璃纤维或纸质薄片。 5.2.4金释放垫：玻璃纤维片，免疫金释放时间小于 5 min，释放效率大于80％。 5.2.5NC膜：孔径为 0.45 μm，4 cm 毛细管时间不小于140s。 5.2.6吸水纸。 1