ICS67.120.30 DB34 B 50 安徽省地方标准 DB 34/T 1421—2011 水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的 快速筛选测定-酶联免疫吸附法 Quick Screening of residues of malachite green and its metabolite in aquatic products ELISA 2011-05-10发布 2011-06-10实施 安徽省质量技术监督局发 布   DB34/T 1421—2011 前言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省渔业环境监测中心提出。 本标准由安徽省质量技术监督局批准。 本标准起草单位：安徽省渔业环境监测中心。 本标准主要起草人：孙德祥、鲍鸣、周作友、董星宇、杨瑞、程金明。 I   DB34/T 1421—2011 水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的 快速筛选测定-酶联免疫吸附法 1范围 本标准规定了水产品中孔雀石绿（Malachitegreen，MG）及其代谢物隐色孔雀石绿（Leucomalachite green，LMG）残留总量的酶联免疫吸附（ELISA）检测方法。 本标准适用于水产品中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿的快速筛选测定。阳性样品须用液相色谱 -串联质谱法（LC/MS-MS）确证。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 SC/T 3016-2004水产品抽样方法 3原理 本方法基于竞争性酶联免疫方法原理。样品中 MG 或 LMG 经提取液和乙腈等提取纯化后，LMG 通 过氧化剂被氧化为 MG，与 MG-生物素竞争微孔板上包被的 MG 抗体，没有结合的 MG-生物素在洗板中 被去除。再加入过量的酶标记的链亲和素，与结合了抗体的 MG-生物素结合，多余的酶标记的链亲和素 在洗板中被去除。结合的酶使随后加入的 HRP 底物(TMB)显色，样品中 MG 和 LMG 含量越少，则结合 的酶越多，颜色则越深，反之，颜色则越浅。 结果用酶标仪在波长 450nm 处，测定吸光度值，在一定浓度范围内吸光度值与样品中 MG 和 LMG 含量成反比。 4试剂和材料 4.1实验室用试剂：所用试剂除另有规定外，均为分析纯。水为符合 GB/T 6682 规定的二级水。 4.2乙腈。 4.3正己烷。 4.4孔雀石绿标准溶液：0 ng/mL、0.05 ng/mL、0.15 ng/mL、0.5 ng/mL、1.5 ng/mL、4.5 ng/mL。 4.5孔雀石绿酶联免疫试剂盒 应在有效期内。超过 1 个月不使用，生物素耦合物、辣根过氧化物酶标记的链亲和素以及标准品 应保存在 -20℃。其它试剂应在 2℃～8℃ 的温度下贮存。不同批次的试剂盒不可混用。 4.5.1微孔板：包被有孔雀石绿抗体。 4.5.2提取液A：使用前，取出提取物A，用90mL双蒸馏水溶解至完全溶解。 4.5.3提取液B：使用前，根据需要量，用双蒸馏水稀释10倍。 1