丝裂霉素是从上世纪开始采用的一代化疗药物，属抗生素类化疗药
物，由链霉菌提取，化学结构具有苯醌、乙酰亚胺基及氨甲酰三个活性
基团，作用与烷化剂相似，与 DNA 链形成交联，抑制 DNA 复制，对
RNA 也有抑制作用，从而抑制细胞的有丝分裂过程，抗肿瘤形成。属细
胞周期非特异性药物。主要用于各种实体肿瘤如胃癌、结肠癌、肝癌、
胰腺癌、非小细胞肺癌、乳腺癌和癌性胸、腹水等。其治疗效果明确，
是表浅性膀胱癌术灌注化疗及晚期复发转移和不能手术的膀胱癌患者全
身化疗的常用的化疗药物之一
尼美舒利是一种非甾体类抗炎药，属于环氧化酶 II 抑制剂。其作用
机制为可以选择性抑制环氧合酶Ⅱ，近年来相关研究表明，环氧化酶
II(cyclooxygenase-2，COX-2)在恶性肿瘤细胞的生长、增殖过程中起重要
作用，它可促进肿瘤细胞增殖，抑制肿瘤细胞凋亡，促进肿瘤的侵袭、
转移等。例如，有研究发现在膀胱癌细胞中环氧化酶-2 表达增高，参与
肿瘤细胞的生长增殖及凋亡，同时在肿瘤组织血管生成、生物性转移过
程中有重要作用。选择性环氧化酶-2 抑制剂如塞来昔布、尼美舒利可明
显抑制膀胱癌细胞生长增殖、诱导凋亡、抑制新生血管和淋巴管生成等，
从而抑制肿瘤侵袭和转移。另有研究证实，在卵巢癌治疗的体内外研究
中，选择性环氧化酶-2 抑制剂同样可以通过抑制瘤体内环氧化酶-2 的表
达，降低 VEGF 的表达，减少血管生成及促进细胞凋亡发挥抗肿瘤作用。因此，针对膀胱癌中高表达的环氧化酶-2，可以选用选择性环氧化酶-2
抑制剂来治疗
目的：
本实验主要探讨尼美舒利（选择性环氧化酶-2 抑制剂）联合丝裂霉
素对膀胱癌 EJ 细胞的抑制作用。应用以上两种药物体外作用于 EJ 细胞，
通过测定凋亡相关基因 caspase-3/BAX/BCL-2 在 EJ 细胞上的表达，观察
对膀胱癌 EJ 细胞促凋亡作用
方法：
1.细胞来源：人膀胱癌 EJ 细胞株（购自上海美轩生物科技有限公
司），药物培养时间分别为 24h、48h、72h
2.实验分组：采用随机对照原则分对照组和实验组，对照组即不做
处理的细胞培养液作阴性对照，实验组按实验药物不同分 3 组：丝裂霉
素 C 组，浓度为 2mg/L；尼美舒利组，浓度为 300umol/L；丝裂霉素 C
（2mg/L）联合尼美舒利组（300umol/L）
3. 对照组和实验组培养 24h，48h，72h,Q-PCR 法测定各干预组细胞
Bcl-2mRNA、BaxmRNA 及 Caspase3mRNA 表达的差异
4. 对照组和实验组培养 24h，48h，72h,Western blot 法测定各干预组
细胞 Bcl-2 蛋白、Bax 蛋白及 Caspase3 蛋白表达的差异
5.统计分析：实验数据使用 SPSS19.0，分别用均数±标准差（
x
±s）
的数据进行表示。多组之间的比较使用单因素析因方差分析法，两组之
间的比较使用 SNK 法，P<0.01 则表示差异有统计学意义
结果：
1.Q-PCR 法测各实验组及空白对照组膀胱癌 EJ 细胞中 Bcl-2mRNA、
BaxmRNA 及 Caspas3mRNA 的表达：分别作用 24h、48h、72h 后，与空
白对照组相比，各实验组的 Bcl-2mRNA 的表达均降低，BaxmRNA 及
Caspase3mRNA 均升高，差异有统计学意义。其中与单药组相比，联合
组的 Bcl-2mRNA 的表达最低，同时 BaxmRNA 及 Caspase3 的表达最高
（P<0.01，差异具有统计学意义)；且随作用时间的延长，联合组中 Bcl-
2mRNA 的表达逐渐降低，BaxmRNA 及 Caspase3mRNA 的表达逐渐升高，
作用 72h 时作用最明显（P＜0.01，差异有统计学意义）。Western-blot
法测各实验组及空白对照组膀胱癌 EJ 细胞中 Bcl-2、Bax 及 Caspas3蛋白
的表达：分别作用 24h、48h、72h 后，与空白对照组相比，各实验组的
Bcl-2 蛋白的表达均降低，Bax 及 Caspase3 蛋白均升高，差异有统计学意
义。其中与单药组相比，联合组的 Bcl-2 蛋白的表达最低，同时 Bax 及
Caspase3 蛋白的表达最高（P<0.05，差异具有统计学意义)；且随作用时
间的延长，联合组中 Bcl-2 蛋白的表达逐渐降低，Bax 及 Caspase3 蛋白
的表达逐渐升高，作用 72h 时作用最明显（P＜0.05，差异有统计学意
义）
结论：
丝裂霉素 C联合尼美舒利在抑制膀胱癌 EJ 细胞的生长，促进细胞凋
亡的过程中有协同作用，且随作用时间的延长抑制作用增强。作用机制
主要与凋亡相关基因 Bcl-2、Bax 及 Caspase3 的表达相关
关键词：尼美舒利；丝裂霉素；环氧化酶-2 抑制剂；膀胱癌 EJ 细胞；
Bcl-2/Bax；Caspase3
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