中华人民共和国国家标准GB5009.5—2016食品安全国家标准食品中蛋白质的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局发布GB5009.5—2016前言本标准代替 GB5009.5—2010《食品安全国家标准GBT14489.2—2008食品中蛋白质的测定 》 /《 粮油检验GBT15673—2009《食用菌中粗蛋白含量的测定》植物油料粗蛋白质的测定》/GBT9695.11—2008GBT5511/ —2008《谷物和豆类 氮含量测定和粗蛋白质含量计算凯氏法》/《肉与肉制品 氮含量测定》和GBT9823/ —2008《粮油检验 植物油料饼粕总含氮量的测定 》本标准与GB5009.5—2010相比,主要变化如下 :———增加附录A蛋白质折算系数ⅠGB5009.5—2016食品安全国家标准食品中蛋白质的测定范围1本标准规定了食品中蛋白质的测定方法本标准第一法和第二法适用于各种食品中蛋 白质的测定,第三法适用于蛋白质含量在10g100g/以上的粮食豆类奶粉米粉蛋白质粉等固体试样的测定本标准不适用于添加无机含氮物质 有机非蛋白质含氮物质的食品的测定第一法凯氏定氮法原理2食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解,产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵 碱化蒸馏使氨游离 ,用硼酸吸收后以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定,根据酸的消耗量计算氮含量,再乘以换算系数, 即为蛋白质的含量试剂和材料3试剂3.1除非另有说明 ,本方法所用试剂均为分析纯 ,水为GBT6682/ 规定的三级水硫酸铜( · )CuSO 5HO3.1.13.1.23.1.33.1.43.1.53.1.63.1.73.1.842硫酸钾( )KSO24硫酸( )HSO24硼酸( )HBO33甲基红指示剂(CH NO15 153 2)溴甲酚绿指示剂 ()CHBrOS21 144 5亚甲基蓝指示剂 (· )3 2CH ClNS HO16 183氢氧化钠(NaOH)3.1.9 95%乙醇(CHOH)2 5试剂配制3.23.2.1硼酸溶液(20gL/):称取20g硼酸,加水溶解后并稀释至 1000mL3.2.2氢氧化钠溶液(400gL/):称取40g氢氧化钠加水溶解后 ,放冷,并稀释至100mL硫酸标准滴定溶液[(13.2.3c HSO)]0.0500molL/或盐酸标准滴定溶液[(cHCl)]0.0500molL/2423.2.4甲基红乙醇溶液(1gL/):称取0.1g甲基红,溶于95%乙醇,用95%乙醇稀释至100mL3.2.5亚甲基蓝乙醇溶液(1gL/):称取0.1g亚甲基蓝,溶于95%乙醇,用95%乙醇稀释至100mL1GB5009.5—20163.2.6溴甲酚绿乙醇溶液(1gL/):称取0.1g溴甲酚绿,溶于95%乙醇,用95%乙醇稀释至100mL3.2.7 A混合指示液:份甲基红乙醇溶液与21份亚甲基蓝乙醇溶液临用时混合 5份溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合 3.2.8 B混合指示液:份甲基红乙醇溶液与1仪器和设备4天平:感量为1mg定氮蒸馏装置 :如图1所示自动凯氏定氮仪 4.14.24.3说明:1———电炉;2———水蒸气发生器 (2L烧瓶);3———螺旋夹;4———小玻杯及棒状玻塞 ;5———反应室;6———反应室外层 ;7———橡皮管及螺旋夹 ;8———冷凝管;9———蒸馏液接收瓶 图 1定氮蒸馏装置图分析步骤5凯氏定氮法5.15.1.1试样处理:称取充分混匀的固体试样0.2g~2g半固体试样2g~5g或液体试样(约当于30mg~40mg氮),精确至0.001g,移入干燥的10g~25g100mL250mL或500mL定氮瓶中,加入0.4g硫酸铜6g硫酸钾及20mL硫酸,轻摇后于瓶口放一小漏斗,将瓶以45℃角斜支于有小孔的石棉网上小心加热,待内容物全部碳化,泡沫完全停止后 ,加强火力,并保持瓶内液体微沸,至液体呈蓝绿色并澄清透明后 ,再继续加热0.5h~1h取下放冷,小心加入20mL水,放冷后,移入100mL瓶中,并用少量水洗定氮瓶 ,洗液并入容量瓶中 ,再加水至刻度 ,混