ICS11.220B 41DB34安徽省地方标准DB 34/T 2791—2016 鸭坦布苏病毒分离鉴定技术规程 Technical Regulation for Isolation and Identification of duck Tembusu Virus 2016-12-30发布2017-01-30实施安徽省质量技术监督局发 布 DB34/T 2791—2016前言本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草本标准由安徽农业大学提出本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口本标准起草单位：安徽农业大学安徽省动物疫病预防与控制中心安徽东方帝维生物制品股份有限公司安庆永强农业科技股份有限公司太湖县徐桥镇综合农业服务中心太湖县天华镇综合农业服务中心本标准起草人：王桂军占松鹤肖华春朱良强祁克宗耿照玉刘雪兰张星陈静刘红梅周迎春黄永强胡凤华李王平王军I DB34/T 2791—2016鸭坦布苏病毒分离鉴定技术规程1范围本标准规定了鸭坦布苏病毒病料采集与处理病毒接种及鉴定技术本标准适用于鸭坦布苏病毒的分离与鉴定2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅所注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件DB34/T 1938鸭黄病毒感染诊断技术规程3试验材料试剂3.1911日龄SPF鸡胚3.211日龄鸭胚3.3乳仓鼠肾细胞(BHK-21)3.4DMEM培养基3.5胎牛血清3.60.01 mol/L pH 7.07.4磷酸盐缓冲液（PBS）3.7TAE缓冲液（50×）3.8青霉素链霉素3.9琼脂糖3.10鸭坦布苏病毒琼脂扩散抗原（由鸭坦布苏病毒安徽分离株AH-F10株（CCTCCNo.V2012013）经甲醛灭活制备而成）3.11鸭坦布苏病毒琼脂扩散抗体（由鸭坦布苏病毒安徽分离株AH-F10株（CCTCCNo.V2012013）制备油乳佐剂灭活制剂免疫健康兔分离血清制备而成）4病料采集与处理4.1病料的采集无菌采集疑似鸭坦布苏病毒感染的病鸭卵巢输卵管胰腺和脑组织样品应置于 -80℃冻结保存4.2病料的初步处理先将病料组织剪碎研磨用灭菌 PBS 与样品按体积质量比 5：1 匀浆将样品匀浆放置于 -20℃中冷冻再室温融解反复三次经 5000 r/min 离心 10 min取上清并加入青霉素和链霉素终浓度为 2000 IU/mL0.22μm 过滤除菌置于 -80℃待用1