ICS11.220DB34B 41安徽省地方标准DB 34/T 3208—2018 羊传染性脓疮病毒分离鉴定技术规程 Technical Regulation for Isolation and Identification of Goat Contagious Ecthyma Virus 2018-10-20发布2018-11-20实施安徽省质量技术监督局发 布 DB34/T 3208—2018前言本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草本标准由安徽农业大学提出本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口本标准起草单位：安徽农业大学安徽省动物疫病预防与控制中心安徽东方帝维生物制品股份有限公司安徽省动物卫生监督所阜阳市动物卫生监督所亳州市谯城区畜牧兽医局旌德县畜牧兽医局阜南县动物疫病预防与控制中心肥东县动物疫病预防与控制中心宿州市动物疫病预防与控制中心本标准主要起草人：王桂军占松鹤李雪松祁克宗朱良强张星张利亚涂健徐前明方保根冯育宁陈静郑举方定平兰梦蝶刘雪梅周迎春王军王楠楠杨德康车跃光I DB34/T 3208—2018羊传染性脓疮病毒分离鉴定技术规程1范围本标准规定了羊传染性脓疮病毒病料采集与处理病毒分离及病毒鉴定技术要点本标准适用于羊传染性脓疮病毒的分离与鉴定2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅所注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件NY/T 541兽医诊断样品采集保存与运输技术规范3试验材料试剂和仪器3.1材料增殖表皮癌细胞（HeLa）羊睾丸原代细胞（Lamb testis cellsLT）DMEM 培养基M199 液体培养基胎牛血清胰蛋白酶0.01 mol/L pH 7.07.4 磷酸盐缓冲液（PBS）青霉素链霉素3.2试剂DNA 提取试剂盒50× TAE 缓冲液琼脂糖3.3仪器细胞培养箱生物安全柜高速冷冻离心机PCR 仪电泳仪紫外凝胶成像系统4样品采集与处理4.1样品的采集按照 NY/T 541 的规定执行无菌采集疑似羊传染性脓疮病毒感染的病羊口唇蹄部痂皮4.2样品的保存样品应置于 -80℃冷冻保存4.3样品的处理先将病料组织剪碎研磨用灭菌 PBS 与样品按体积质量比 5﹕1 匀浆将样品匀浆冻存后再室温融解反复三次经 5000 r/min 离心 10 min取上清并加入青霉素和链霉素终浓度为 2000IU/mL0.22μm 过滤除菌置于 -80℃待用1