ICS 65.020.20 B 04DB12天 津市地方 标 准DB12/T 884—2019百合鱗茎中多糖的含量测定紫外/可见分Determination of polysaccharide in Lily Bulbus-UV/VIS spectrophotometry 2019-03- 15 发布 2019-05-01 实施天津市市场监督管理委员会 发布刖言本标准依据GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由天津市农业科学院提出并归口。本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所。本标准主要起草人：刘征辉、魏静娜、赵琳琳、张强、赵云平、薛天凯、徐石勇、郑贵忠。百合鳞茎中多糖的含量测定紫外/可见分光光度法i范围本标准规定了紫外/可见分光光度法测定百合鳞茎中多糖含量的原理、试剂材料、仪器设备、分析 步骤、分析结果表述和精密度。本标准适用于百合鳞茎干品及鲜品中多糖含量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法。3原理百合样品经水回流提取后得到的水提液，加乙醇沉淀得百合多糖，百合多糖加水溶解后，用蒽酮硫 酸法在585 nm波长处测定吸光度，用葡萄糖做标准品，外标法定量。4试剂和材料4.1试剂4.1.1 乙醇（C2H5〇H)。4.1.2 蒽酮（C14H10O)。4.1.3 浓硫酸（H2S〇4):浓度 95 %.98 % (g/g)。4.1.4 水（H20): GB/T 6682 规定的一级水。注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯4.2试剂配制蒽酮硫酸溶液（0.2 %):称取蒽酮0.20 g，加100 mL浓硫酸溶解，摇匀，即得。现用现配。4.3标准品葡萄糖标准品（C6H12O):纯度彡98 %，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。4.4标准溶液配制4.4.1葡萄糖标准储备液（1 mg/mL):取干燥至恒重的葡萄糖对照品50 mg，精密称定，用水溶解并 定容至50 mL，摇匀，即得，4 °C以下保存。4 4 2葡萄糖标准系列工作溶液：精密量取葡萄糖标准储备液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，分别 置 50 mL 容量瓶中，用水定容，摇匀，得浓度为 20 jjg/mL、40 网/mL、60 jjg/mL、80 jjg/mL、100 jjg/mL的标准系列工作溶液。5仪器和设备5.1粉碎机。5.2 天平：感量 0.001 g 和 0.0001 g。5.3 圆底烧瓶：250 mL。5.4水浴锅。5.5具塞塑料离心管：聚丙烯，10 mL。5.6 容量瓶：10 mL、50 mL。5.7具塞比色管或刻度试管：10 mL。5.8紫外/可见分光光度计：配有1 cm的玻璃或石英比色杯。5.9涡旋混合仪。5.10 离心机：转速>6000 r/min。5.11试验筛：40目。6分析步骤6.1样品制备 6.1.1干品采样量要求大于500 g，经粉碎机充分粉碎均匀，过40目筛，均分成两份，分别装入洁净容器内作 为试样，密封并标明标记，于0.4 °C下冷藏保存。6.1.2鲜品采样量要求大于500 g，于真空干燥箱中50 C烘干后，按照干品处理方法6.1.1处理。6.2样品提取取样品粉末约1 g，精密称定，置250 mL圆底烧瓶中，精密加入100 mL水，称定重量，水浴加热回 流2 h，放冷，再称定重量，加水补足减失的重量，离心（6000 r/min，10 min)，精密吸取上清液1.5 mL，加入乙醇7.5 mL，摇匀，置4 C冰箱中放置3 h，离心（6000 r/min，10 min)，倾去上清液，沉 淀加热水溶解，并转移至50 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。6.3测定准确吸取样品提取液及标准系列工作溶液各1 mL，置10 mL具塞试管中，分别准确加入0.2 %蒽酮硫 酸溶液（4.2) 4 mL，于涡旋仪上混匀，置沸水浴中加热10 min，取出，冰浴中冷却5 min，取出，以相 应的试剂为空白，在585 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，标准系列工作溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，其线性相关系数应大于0.99, 待测样液的响应值应在标准曲线线性范围内。7分析结果表述试样中百合多糖的含量按式（1)计算:Xc x 5 x V x V V2 x m x 1000000x 100式中：X——试样中百合多糖的含量，单位为克每一百克（g/100g); c——由标准曲线得到的待测样液显色后的浓度，单位为微克每毫升（pg/mL);5----显色后的总体积，单位为毫升（mL);V——乙醇沉淀后所得百合多糖的溶解体积，单位为毫升（mL);V——提取用水的体积，单位为毫升（mL));V——用于沉淀多糖的提取液体积，单位为毫升（mL); m——样品重量（减去水分之后的干燥品重量），单位为克（g);1000000——换算系数。计算结果保留三位有效数字。⑴8精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %