进出口肉及肉制品中维吉尼霉素残留量检验方法杯碟法Methodforthedeterminationofvirginiamycinresiduesinmeatsandmeatproductsforimportandexport--CylindermethodSN／T1134—2002前言本标准中的测定方法是采用日本厚生省1990年所编制的《畜、水产食品中的残留物质检验方法》中维吉尼霉素检验方法，其技术内容与原方法相同，具体操作方法稍加改动，经试验和验证后，按规定要求作了编辑性修改。本标准中同时制定了抽样和制样方法。测定低限是根据国际上对肉品中维吉尼霉素残留量和测定方法灵敏度而制定的。本标准的附录A是规范性附录，附录B是资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局。本标准主要起草人：王素琴、何霖、孙俐、陈子红。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。1范围本标准规定了进出口肉及肉制品中维吉尼霉素残留量检验的抽样、制样和杯碟测定方法。本标准适用于进出口冻鸡肉中维吉尼霉素残留量的检验。2抽样和制样2.1检验批以不超过2500件为一检验批。同一检验批的商品应具相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。2.2抽样数量批量／件最低抽样数／件1～251212516～1002550150501～1～1～0002110500517001～00202.3抽样方法按2.2规定的抽样件数随机抽取，逐渐开启。每件至少一袋为原始样品。如每件中无小包装或有小包装，但每袋重量超过2kkg，加封后标明标记，及时送交实验室。g，则可用灭菌刀从每件中割取不少于100g样品，混合后置于清洁容器内作为混合样品。原始样的总量不少22.4试样制备从原始样品中取出部分有代表性的样品，将可食部分用绞碎机绞碎，充分混匀，用四分法缩分至不少于500g，作为试样，装入清洁容器内，密封后，标明标记。2.5试样保存 将试样于一18℃以下冷冻保存。注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染后发生残留物含量的变化。3测定方法3.1方法提要用乙醇提取试样中残留的维吉尼霉素，经均质、离心后取上清液作为样液，取上清液与结膜干燥棒杆菌作用，根据产生抑菌圈直径大小，并查阅标准曲线，计算出样品中维吉尼霉素的残留量。3.2试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。本方法标准品及其标准溶液均以效价计。3333333.......2222222.......1无水乙醇。2无水甲醇。3甲醇+水(1+2)。4生理盐水：称取5磷酸二氢钾。6磷酸氢二钠。8.5g氯化钠，溶于1000mL水中，121℃灭菌15mi40n。7磷酸盐缓冲液(pH6.O)：称取3.05g磷酸二氢钾(精确至0.1g)溶于0mL水中，另外称取3.0g磷酸氢二钠(精确至0.1g)，溶于400mL水中，将两种溶液混合在一起定容至100mL。3.2.8维吉尼霉素标准品。3.2.备液，于9维吉尼霉素标准贮备液：准确称取适量的维吉尼霉素标准品，用甲醇溶液(3.2.3)溶解后定容至50mL，配成1000μg／mL的维吉尼霉素标准贮4℃保存，一周内使用。30..24μg／.8μg／.10维吉尼霉素标准工作液：吸取一定量的标准贮备液，用磷酸盐缓冲液分别稀释成浓度为O.00.00.0.mL和0mL标准工作溶液，以上稀释均须当日配制。333333333333333...............2222....11111实验菌种：结膜干燥棒杆菌(Corynebacteriumxerosis)。2培养基I(见附录A1AA)。3培养基Ⅱ(见附录2)。)。4培养基Ⅲ(见附录33仪器和设备1游标卡尺：测量范围2牛津杯：高3离心机：不低于333333333.........0.0mm～mm，内径r／n。200mm，精度0.02mm，或抑菌圈测量仪。mm，外径8.Omm±0.1mm。10mm±016.Omm±0.1300mi4恒温培养箱：30℃±1℃，36℃±1℃，50℃±1℃，隔板保持水平。5高压灭菌器。6绞碎机：不低于3100000r／min。7均质器：不低于0m0r／min，带均质杯250mL。8培养皿：内径90m，底部平整光滑的玻璃皿或塑料皿，并应配有陶瓦盖。9其他：玻璃板、吸管、毛细管等。4测定步骤 3.4.1试液制备准确称取10g试样(精确至0.1g)于均质杯中，加入10mL乙醇，均质2min后移人离心管中，以3000r／min离心20min，取其上清液，作为试液。3.4.2菌液的制备将实验菌种1℃培养24(3.2.h，将培养物划线接种到培养基I斜面上。11)安瓿瓶的上部消毒后敲碎，加入少量培养基Ⅱ于试验菌种中，使其充分溶解并移至盛有培养基Ⅱ的试管中混均，置37℃±用适量灭菌生理盐水冲洗菌苔并转入灭菌试管中，4℃保存，可使用一周。33..44..3测定3.1平板制备将培养基Ⅲ熔化并冷却至50℃±1℃，加入适量的菌液，使之充分混合后，取8mL注入灭菌平皿中，保持水平，待其凝固后备用。测定前，须先用20v.g／L标准工作液所呈现的抑菌圈直径在05μg／mL及m0.O.010mm2μg／mL的维吉尼霉素标准工作液进行预测试，经培养后，5μg／mL标准工作液所呈现的抑菌圈直径在mm～mm，该菌液浓度为最佳。～1