中华人民共和国国家标准GB 4789.5—2012食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验2012-05-17发布2012-07-17实施中华人民共和国卫生部发布 GB 4789.5-2012前言本标准代替GB/T 4789.5-2003《食品卫生微生物学检验本标准与 GB/T 4789.5-2003相比，主要变化如下：——修改了标准名称；志贺氏菌检验》。——修改了培养基和试剂；——修改了操作步骤中增菌部分和生化试验及附加生化试验部分；——修改了表2；——修改了表4。I GB 4789.5-2012食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验12范围本标准规定了食品中志贺氏菌(Shigella)的检验方法。本标准适用于食品中志贺氏菌的检验。设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a） 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃；b） 冰箱：2 ℃～5 ℃；c） 膜过滤系统；d） 厌氧培养装置：41.5 ℃?1℃；e） 电子天平：感量0.1 g；f） 显微镜：10×～100×；g） 均质器；h） 振荡器；i） 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头；j） 无菌均质杯或无菌均质袋：容量500 mL；k） 无菌培养皿：直径90 mm；l） pH计或pH比色管或精密pH试纸；m） 全自动微生物生化鉴定系统。3培养基和试剂3.1志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素：见附录A 中 A.1。3.2 麦康凯（MAC）琼脂：见附录 A 中 A.2。3.3 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（XLD）琼脂：见附录 A 中 A.3。3.4志贺氏菌显色培养基。3.5三糖铁（TSI）琼脂：见附录A 中 A.4。3.6 营养琼脂斜面：见附录 A 中 A.5。3.7半固体琼脂：见附录A 中 A.6。3.8葡萄糖铵培养基：见附录A 中 A.7。3.9 尿素琼脂：见附录 A 中 A.8。2 GB 4789.5-20123.10β-半乳糖苷酶培养基：见附录 A中 A.9。3.11氨基酸脱羧酶试验培养基：见附录A中 A.10。3.12糖发酵管：见附录A中 A.11。3.13西蒙氏柠檬酸盐培养基：见附录A中 A.12。3.14粘液酸盐培养基：见附录A中 A. 13。3.15蛋白胨水、靛基质试剂：见附录A中 A.14。3.16志贺氏菌属诊断血清。3.17生化鉴定试剂盒。4检验程序志贺氏菌检验程序见图 1。3 GB 4789.5-2012检样25 g（或 25 mL）样品+志贺氏菌增菌肉汤 225 mL41.5℃±１℃，16 h～20 h厌氧培养XLDMAC或志贺氏菌显色培养基36℃±１℃，20h～48 h挑取可疑菌落TSI，半固体，营养琼脂斜面血清学分型生化鉴定志贺氏菌属分群及分型结果报告图1志贺氏菌检验程序5操作步骤5.1增菌以无菌操作取检样 25 g（mL），加入装有灭菌 225 mL志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片式均质器以 8 000 r/min～10 000 r/min均质；或加入装有225 mL志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质器连续均质 1 min～2 min，液体样品振荡混匀即可。于 41.5℃±１℃，厌氧培养16 h～20 h。5.2分离取增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于 XLD琼脂平板和 MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上，于 36℃?1℃培养 20 h～24 h，观察各个平板上生长的菌落形态。宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大于其他志贺氏菌。若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至 48 h再进行观察。志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表1。4