中华人民共和国国家标准 GB4789.31—2013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌 的肠杆菌科噬菌体诊断检验 2013-11-29发布 2014-06-01实施  GB4789.31—2013 前言 本标准代替 GB/T 4789.31-2003《食品卫生微生物学检验沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌 的肠杆菌科噬菌体检验方法》。 本标准与 GB/T 4789.31-2003相比,主要变化如下： ——修改了操作步骤； ——增加了附录 B。 I  GB4789.31—2013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的 肠杆菌科噬菌体诊断检验 1 2 范围 本标准规定了应用肠杆菌科噬菌体诊断方法检验食品中沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌。 本标准适用于各类食品和食源性疾病事件样品中沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的检验。 本标准适用于食品行业从业人员肠道沙门氏菌和志贺氏菌带菌检验。 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌、培养的设备外，其他设备和材料如下： a) b) c) d) e) 恒温培养箱：36℃±1℃, 42℃±1℃，50℃±1℃; 厌氧培养装置：41.5℃±0.5℃; 显微镜：10倍～100倍; 水平仪：噬菌体试验的工作台面应调整至水平位置; 已灭菌 1 mL一次性注射器（应为塑料材质），针头无编号，使用前测定每滴5 ?L~10 ?L（每 mL有100~200滴）可用; f) g) h) i) 微量移液器及吸头（10 ?L和5 ?L）; 定量移液器及吸头（100 ?L和50 ?L）; 无菌吸管：10 mL、5 mL、1 mL; 无菌毛细管; j) 无菌培养皿：90 mm; k) l) 无菌棉签; 带盖的灭菌小试管：8 mm×50 mm; m)载物玻片。 3 培养基和试剂 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液：见附录 A中的A.1。 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液：见附录 A中的A.2。 志贺氏菌（BCT）增菌液：见附录 A中的A.3。 营养肉汤（NB）：见附录 A中的A.4。 营养琼脂（NA）：见附录 A中的A.5。 营养半固体琼脂（NSA）：见附录 A中的A.6。 1  GB4789.31—2013 3.7 3.8 3.9 三糖铁琼脂（TSI）：见附录 A中的A.7。 葡萄糖铵琼脂：见附录 A中的A.8。 肠杆菌科诊断用噬菌体，7种和3种。必要时可再购置大肠埃希氏菌分型噬菌体（6种）一套。安 瓿开启后用无菌毛细管吸出移入灭菌小试管内，如果每次使用量很少，可分装于 2~3支试管内，保存于 5℃冰箱备用。 3.10 沙门氏菌因子血清，志贺氏菌分型因子血清，致泻大肠埃希氏菌分型因子血清。因子血清的种类 视需要而定。 4 检验程序 4.1 沙门氏菌的检验程序 沙门氏菌的检验程序见图 1。 2  GB4789.31—2013 检 样 前增菌、增菌和分离 挑取可疑菌落 噬菌体试验 TSI(斜面、底面、产气、H2S) 蛋白胨水（靛基质） 尿素（pH7.2）,KCN,赖氨酸 O-1裂解 非如左述的 各种噬菌体 均不裂解 其他均不裂解 各种裂解结果 H2S+,靛基质－，H2S+，靛基质+， 尿素－，KCN－，尿素－，KCN－， H2S－，靛基质－， 非如左述的 尿素－，KCN－， 赖氨酸+/－ 各种反应结果 赖氨酸＋ 赖氨酸+ 甘露醇、山梨醇 ONPG ＋,＋,－ 沙门氏菌 －,－ + 沙门氏菌 非沙门氏菌 沙门氏菌 非沙门氏菌 非沙门氏菌 血清学试验证实 血清学试验证实 血清学试验证实 报 告 图1 沙门氏菌的检验程序 4.2 志贺氏菌的检验程序 志贺氏菌的检验程序见图 2。 3