中华人民共和国国家标准 GB4789.9—2014 食品安全国家标准 食品微生物学检验空肠弯曲菌检验 2014-12-01发布 2015-05-01实施  GB4789.9—2014 前言 本标准代替 GB/T 4789.9-2008《食品卫生微生物学检验空肠弯曲菌检验》。 本标准与 GB/T 4789.9-2008相比，主要变化如下： ——修改了标准的中文名称； ——修改了范围； ——修改了设备和材料； ——修改了培养基和试剂； ——修改了样品处理； ——删除了药物敏感性试验； ——删除了第二法全自动酶联荧光免疫分析仪筛选法。 I  GB4789.9—2014 食品安全国家标准 食品微生物学检验空肠弯曲菌检验 1 2 范围 本标准规定了食品中空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）的检验方法。 本标准适用于食品中空肠弯曲菌的检验。 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： a) b) c) d) e) f) 恒温培养箱：25℃±1℃、36℃±1℃、42℃±1℃； 冰箱：2℃～5℃； 恒温振荡培养箱：36℃±1℃、42℃±1℃； 天平：感量 0.1 g； 均质器与配套均质袋； 振荡器； g) h) i) 无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL刻度）、10mL（具 0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头； 无菌锥形瓶：容量 100 mL、200 mL、2 000 mL； 无菌培养皿：直径 90 mm； j) pH计或pH比色管或精密pH试纸； k) l) 水浴装置：36℃±1℃、100℃； 微需氧培养装置：提供微需氧条件（5%氧气、10%二氧化碳和 85%氮气）； m)过滤装置及滤膜（0.22μm、0.45 μm）； n) o) p) q) 显微镜：10倍～100倍，有相差功能； 离心机：离心速度≥20000 g； 比浊仪； 微生物生化鉴定系统。 3 培养基和试剂 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 Bolton肉汤（Bolton broth）：见附录 A中A.1。 改良 CCD琼脂（modifiedCharcoal Cefoperazone Deoxycholate Agar, mCCDA）：见附录 A中A.2。 哥伦比亚血琼脂（Columbia blood agar）：见附录 A中A.3。 布氏肉汤（Brucella broth）：见附录 A中A.4。 氧化酶试剂：见附录 A中A.5。 马尿酸钠水解试剂：见附录 A中A.6。 Skirrow血琼脂（Skirrowblood agar）：见附录 A中A.7。 吲哚乙酸酯纸片：见附录 A中A.8。 0.1%蛋白胨水：见附录 A中A.9。 3.10 1mol / L硫代硫酸钠（Na2S2O3）溶液：见附录A中A.10。 1  GB4789.9—2014 3.11 3.12 3.13 3%过氧化氢（H2O2）溶液：见附录 A中A.11。 空肠弯曲菌显色培养基。 生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡。 4 检验程序 空肠弯曲菌检验程序见图 1。 样品处理 Bolton肉汤预增菌，微需氧 36℃±1℃ 4 h Bolton肉汤增菌，微需氧 42℃±1℃ 24 h～48 h 接种 Skirrow与 mCCD琼脂平板，或显色培养基 42℃±1℃ 24 h～48 h 挑取可疑菌落，接种哥伦比亚血琼脂平板 42℃±1℃ 24 h～48 h 镜检 动力 试验 微需氧 25℃±1℃ 有氧 42℃±1℃ 氧化酶 试验 生长试验 生长试验 弯曲菌属 过氧化氢酶 试验 马尿酸钠 水解试验 吲哚乙酸酯水 解试验 空肠弯曲菌 报告 图1 空肠弯曲菌检验程序 2  GB4789.9—2014 5 操作步骤 样品处理 5.1 5.1.1 一般样品 取 25 g（mL)样品（水果、蔬菜、水产品为 50g）加入盛有 225 mL Bolton肉汤的有滤网的均质袋 中（若为无滤网均质袋可使用无菌纱布过滤），用拍击式均质器均质 1 min～2 min，经滤网或无菌纱布过 滤，将滤过液进行培养。 5.1.2 整禽等样品 用 200 mL 0.1%的蛋白胨水中充分冲洗样品的内外部，并振荡2 min～3 min，经无菌纱布过滤至250 mL离心管中，16000g离心15 min后弃去上清，用10 mL 0.1%蛋白胨水悬浮沉淀，吸取 3 mL于100 mL Bolton肉汤中进行培养。 5.1.3 贝类 取至少 12个带壳样品，除去外壳后将所有内容物放到均质袋中，用拍击式均质器均质1 min～2 min， 取 25g样品至 225 mL Bolton肉汤中（1:10稀释），充分震荡后再转移25 mL于225 mL Bolton肉汤中（1:100 稀释），将 1:10和1:100稀释的Bolton肉汤同时进行培养。 5.1.4 蛋黄液或蛋浆 取 25 g（mL)样品于 125 mL Bolton肉汤中并混匀（1:6稀释），再转移 25 mL于100 mL Bolton肉 汤中并混匀（1:30稀释），同时将1:6和1:30稀释的Bolton肉汤进行培养。 5.1.5 鲜乳、冰淇淋、奶酪等 若为液体乳制品取 50 g；若为固体乳制品取 50 g加入盛有50 mL 0.1%蛋白胨水的有滤网均质袋中， 用拍击式均质器均质 15 s～30 s，保留过滤液。必要时调整 pH值至7.5±0.2，将液体乳制品或滤过液以 20000 g离心 30 min后弃去上清，用10 mL Bolton肉汤悬浮沉淀（尽量避免带入油层），再转移至90 mL Bolton肉汤进行培养。 5.1.6 需表面涂拭检测的样品 无菌棉签擦拭检测样品的表面（面积至少 100 cm2以上），将棉签头剪落到100 mL Bolton肉汤中进 行培养。 5.1.7 水样 将 4 L的水（对于氯处理的水，在过滤前每升水中加入 5 mL 1mol/L硫代硫酸钠溶液）经0.45μm 滤膜过滤，把滤膜浸没在 100 mL Bolton肉汤中进行培养。 5.2 预增菌与增菌 在微需氧条件下，36℃±1℃培养 4 h，如条件允许配以 100 r/min的速度进行振荡。必要时测定增菌 液的 pH值并调整至7.4 ± 0.2，42℃±1℃继续培养 24 h～48 h。 5.3 分离 将 24 h增菌液、48h增菌液及对应的