ICS 07.080 B 41 DB13 河北省地方标准 DB 13/T 5143—2019 畜禽组织及体液中多种抗生素残留 快速检测 微生物抑制法 2019 - 12 - 27发布 2020 - 01 - 28实施 河北省市场监督管理局 发布 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由河北省农业农村厅提出。 本标准起草单位：河北省兽药监察所、河北科星药业有限公司、北京中检葆泰生物技术有限公司、 邢台市动物卫生监督所、衡水市农业环境与农畜产品质量监督管理站、沧州市农产品质量检验监测中 心、承德市畜禽水产品质量检验监测中心、石家庄市畜产品质量监测中心、石家庄市畜牧兽医技术开 发中心、唐山市食品药品综合检验检测中心。 本标准主要起草人：刘怡菲、王萍、王振来、刘龙飞、牛志勇、钱春彩、段培姿、王爱卿、刘力、 李云、张峰、闫超、李海龙、李文香、李研东、武侠均、赵芳、崔沙沙、陈宝明、李肖莉。 畜禽组织及体液中多种抗生素残留快速检测 微生物抑制法 1 范围 本标准规定了畜禽组织及体液中β-内酰胺类、磺胺类、氟喹诺酮类、四环素类、大环内酯类、氨基 糖苷类、酰胺醇类七大类抗生素残留的微生物抑制法的制样和检测方法。 本标准适用于畜禽肾脏、肝脏、肌肉、血清和尿液中β-内酰胺类、磺胺类、氟喹诺酮类、四环素类、 大环内酯类、氨基糖苷类、酰胺醇类七大类抗生素残留的快速检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 通过抑制微生物生长的检测方法来检测畜禽组织或体液中的抗生素。细菌在含有pH指示剂的琼脂 中培养，使用拭子对畜禽组织或体液进行提取，如果样品中不含有抗生素，细菌生长不受抑制，产生 的酸会使含有紫色指示剂的琼脂变成黄色；如果样品中含有抗生素，细菌生长会受到抑制，指示剂显 示紫色。 4 试剂和材料 除另有说明外，本法所用的试剂确认为分析纯试剂，水为符合GB/T 6682规定的二级水。 4.1 检测试剂盒 a) 检测棒； b) 取样拭子； c) 洗脱反应缓冲液； d) 检测微管（含有微生物的固化培养基）； e) 阴性质控片：冷藏保存（2℃～8℃）； f) 阳性质控片Ⅰ：青霉素G标准品固体； g) 阳性质控片Ⅱ:庆大霉素标准品固体； h) 反应药片：用于尿液和血清样品的检测，冷藏保存（2℃～8℃）。 注：检测试剂盒是由Charm Science公司提供的产品。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产 品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。 4.2 阴性质控样品制备 4.2.1 组织类阴性质控样品制备：取出1片阴性质控片（4.1.2）放置在提供的带有螺帽的离心管中， 加入1.0 mL水，振荡10 s使阴性质控片（4.1.2）充分溶解。放置5 min后再次振荡，制成阴性质控 样品溶液,冷藏保存（2℃～8℃）,保存期为5d。 4.2.2 血清和尿液阴性质控样品：直接使用阴性血清或阴性尿液样品作为阴性质控样品。 4.3 阳性质控样品Ⅰ的配制（用于肾脏、肝脏、肌肉、家畜血清和尿液样品的测定）：用0.8 mL阴 性质控样品（4.2）溶解阳性质控片Ⅰ（4.1.3），制成浓度为50 ng/mL的阳性质控样品Ⅰ。阳性质控 样品Ⅰ可冷藏保存（2℃～8℃）72 h；制备后6 h内置于-15℃以下冷冻，可保存3周，解冻的阳性质 控样品可冷藏保存（2℃～8℃）24 h。 4.4 阳性质控样品Ⅱ制备（用于家禽血清样品的检测）：用10 mL水溶解阳性质控片Ⅱ（4.1.4）， 制得浓度为5000 ng/mL的标准溶液。取0.75 mL上述标准溶液，加入4.25 mL阴性血清，制得阳性质控 样品Ⅱ，庆大霉素浓度为750 ng/mL。 5 仪器设备 a) 孵育器：温度设置64℃±1℃； b) 结果判读卡：见附录B； c) 离心机：最高离心力大于1200 g； d) 移液器及吸头：100 μL～1000 μL、20 μL～200 μL和1 mL～5 mL； e) 离心