,...,..…,.........................................,....................................................3 ABSTRACT..................................................................................,.........................5 缩略词表.............................................,............................,................................7 1前言,...........................................................,...........‘.............................8 1 . 1问题的提出.............,.,..........,......................................................8 1.2研究进展.…,...................................................‘.........、..…‘,…,、、..…,二,.,..…9 1 . 2 . 1花药培养在作物育种上的应用.,...............g 1 . 2 . 2花药培养及其再生植株倍性变异,..........,…10 1 . 2 . 3草荀脱毒技术及病毒鉴定研究进展............,二,…11 1.2.3.1草墓脱毒的意义.......................,…,..........,..................n 1 . 2.3.2脱毒方法...........................................................,...............12 1.2.3.2.1基于茎尖培养的脱毒..........................................................12 1.2.3.2.2花药培养脱毒................................,...............................13 1.2.3.3草蓦病毒鉴定及脱毒效果检测..........................,............14 1 . 2 . 4草墓脱毒苗的应用效果......................,.15 1.3本研究的目的和内容,................,...........................,...,..…15 2材料和方法......................................,..............................................................17 2 . 1材料..................................,....................................................................17 2.2方法二,.…‘...........................................................................,..................17 2 . 2 . 1小抱子发育时期的观察...............17 2 . 2.2培养基配方及花药培养条件…,.....................17 2 . 2.3花蕾的预处理与消毒......................,17 2 . 2 . 4培养过程中数据的调查与统计.........,.......17 2 . 2 . 5石蜡切片观察再生植株的起源...,.............18 2 . 2 . 6生根培养及再生植株根尖染色体计数.................18 2 . 2 . 7流式细胞仪鉴定再生植株倍性..............,二,..…18 2 . 2.8再生植株生根培养及大田移栽二,.,...:-.…,…18 3结果与分析......,..................................,.........,、...........,..…,............20 3 . 1花药培养再生植株...............................,...............................................20 3 . 1.1花药在培养过程中的形态变化…,................,.20 3 . 1 . 2愈伤组织的诱导.........,.,..…,.,.........20 3 . 1 . 2 . 1低温预处理对愈伤组织诱导的影响............................,..203.1.2.2温度对愈伤组织诱导的影响........................................,..21 3 . 1.2.3蔗糖对愈伤组织诱导的影响................................................,21 3 . 1.2.4激素对愈伤组织诱导的影响........,二,...............................23 3 . 1.2.5不同花序的花药愈伤组织诱导的差异..................,........23 3 . 1 . 3不定芽的分化与增殖..................,......24 3 . 1.3.1不定芽的分化................,.....,.....................................24 3 . 1 . 3 . 2不定芽的增殖.........................................................................24 32再生植株起源的细胞学观察.…............................,...................,.,25 3 , 2 . 1小抱子在培养过程中的细胞学特点...................25 3,2.2培养过程中花药体细胞组织的细胞学变化.............26 3.2.3再生植株起源..…,.....................…26 3 . 3再生植株倍性鉴定.................................................................,.............26 3 . 3 . 1再生植株根尖染色体计数....、.…、...........26 3 . 3 . 2流式细胞仪检测再生植株DNA含量...................28 3 . 4再生植株田间生长情况.....,..…,...........................................................30 3 . 4 . 1生根与移栽.,.,....,............30 3 . 4 . 2大田生长鉴定.....................................30 4讨论...........................,...............................,.....................,...........,.32 4.1影响草毒花药愈伤组织分化的因素.........................................................32 4 . 川愈伤组织的生长状态与植株再生能力.,‘二、.,...32 4 . 1,2激素水平及配比.,..................,.,.,...,32 4.2蔗糖和低温预处理提高愈伤组织诱导的机理.........................................33 4.3再生植株倍性变异机理…,二,............................‘...................................34 4 . 4花药培养作为脱毒手段的可行性.............,.........................................34