食品中罗丹明B的测定 BJS 201905 1 范围 本方法规定了食品中罗丹明B的液相色谱测定方法及液相色谱-质谱/质谱确证方法。 本方法适用于半固态调味料、花椒及花椒粉、花椒油、牛肉干、蜜饯、水果干制品中罗 丹明B的测定和确证。 2 原理 试样中罗丹明B用含酸的甲醇水溶液提取后，经混合型阳离子固相萃取小柱净化，采 用液相色谱荧光检测器检测，外标法定量。试样中检出罗丹明B后采用液相色谱质谱/质谱 法进行确证。 3 试剂和材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 3.1 甲醇（CH3OH）：色谱纯。 3.2 乙腈（C2H3N）：色谱纯。 3.3 甲酸（CH2O2）：色谱纯。 3.4 氨水（NH.·H.O）：色谱纯。 3.5 含0.1%甲酸的水溶液: 取甲酸（3.3）1 mL用水稀释至1000 mL， 用滤膜（0.22 μm， 水相）过滤后备用。 3.6 50%甲醇水溶液:准确量取500 mL甲醇（3.1）于1 L容量瓶中，用水定容至刻度。 3.7 含0.1%甲酸的甲醇水溶液：取1 mL甲酸（3.3），用甲醇水溶液（3.6）稀释至1000 mL。 3.8 含0.1%甲酸的乙腈溶液：取1 mL甲酸（3.3），用乙腈（3.2）稀释至1000 mL，滤膜 （0.22 μm，有机相）过滤后备用。 3.9 含0.1%甲酸的乙腈水溶液：取0.1 mL甲酸（3.3）和35 mL乙腈（3.2），用水稀释至 100 mL，混匀。 3.10 含5%氨水的甲醇溶液：取5 mL氨水（3.4），用甲醇稀释至100mL，混匀。（临用 现配） 3.11 罗丹明B标准品： 罗丹明B标准品的分子式、相对分子量、英文名称、CAS登录号见表1，纯度≥99%。 表1 罗丹明B标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量 中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子量 罗丹明B Rhodamine B 81-88-9 C28H31ClN2O3 479.01 3.12 罗丹明B标准储备液：准确称取罗丹明B标准品10 mg（精确至0.0001 g），置于 100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成浓度为100 μg/mL的标准储备液。 溶液转移至试剂瓶中，置于-18℃避光保存，有效期为6个月。 3.13 中间标准溶液：准确移取0.5 mL罗丹明B标准储备液（3.12）于100 mL容量瓶中， 用甲醇定容至刻度，混匀，此溶液的浓度为500 ng/mL。置于4℃避光保存，有效期为1个 月。 3.14 标准工作溶液：用含0.1%甲酸的乙腈水溶液（3.9）将中间标准溶液（3.13）稀释成 0.0 ng/mL、0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL、20.0 ng/mL、50.0 ng/mL 的标准工作溶液。临用现配。 3.15 混合型阳离子固相萃取柱（60 mg/3mL）：基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高 聚物，或相当者。使用前依次用3 mL甲醇，3 mL水活化。 3.16 陶瓷均质子。 4 仪器和设备 4.1 液相色谱仪：配荧光检测器。 4.2 液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI源）。 4.3 旋涡混合器。 4.4 离心机：转速≥8000 r/min。 4.5 电子天平：感量分别为0.0001 g和0.01 g。 4.6 具塞离心管：50 mL。 4.7 组织捣碎机。 4.8 固相萃取装置。 5 试样制备与保存 5.1 半固态调味料 取适量样品，捣碎，混匀，常温保存备用。 5.2 花椒及花椒粉 取适量样品，粉碎后过40目筛，常温保存备用。 5.3 花椒油 充分混匀，常温保存备用。 5.4 牛肉干 取适量样品，捣碎，混合均匀，冷藏保存备用。 5.5 蜜饯、水果干制品 取适量样品，捣碎，混合均匀，冷藏保存备用。 6 测定步骤 6.1 试样前处理 6.1.1 提取：准确称取2 g（香辛料样品称取1 g，精确至0.01 g）试样置于50 mL塑料离 心管中，准确加入10.0 mL含0.1%甲