附件1 土豆及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱的测定BJS 201806 1范围本方法规定了土豆及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱含量的液相色谱-串联质谱测定方法。本方法适用于土豆及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱含量的测定。2原理样品经酸化乙腈提取，用液相色谱-串联质谱仪测定，采用外标法定量。3试剂和材料以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯，水应为符合GB/T 6682规定的一级水。3.1试剂3.1.13.1.23.1.33.1.43.1.53.1.63.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。乙腈（CH3CN）：色谱纯。甲酸（HCOOH）：色谱纯。甲酸铵（ HCOONH 4）：色谱纯。无水硫酸镁（ MgSO4）：分析纯。无水乙酸钠（ CH3COONa）：分析纯。试剂配制3.2.1甲酸-甲酸铵缓冲溶液：称取甲酸铵（ 3.1.4）0.063 g于烧杯中，加适量水溶解后转移到1000mL容量瓶中，再移取甲酸（ 3.1.3）1 mL于同一容量瓶中，加水定容至刻度。3.2.2酸化乙腈：移取甲酸（3.1.3）10mL于1000mL容量瓶中，加乙腈（ 3.1.2）定容至刻度。3.2.3甲醇水溶液（ 50%，体积分数）：移取甲醇（3.1.1）500 mL于1000mL容量瓶中，加水定容至刻度。3.3标准品α-茄碱和α-卡茄碱标准品的英文名称、 CAS登录号、分子式、相对分子质量详见附录A中的表A.1。3.4标准溶液配制3.4.1α-茄碱和 α-卡茄碱混合标准储备液（2.50mg/mL）：分别准确称取 α-茄碱和 α-卡茄碱标准品（3.3）各 5.00 mg于同一烧杯中，加入少量乙腈（3.1.3）溶解后转移至 20.0 mL容量瓶中，加入乙腈并定容至刻度，制成浓度为 2.50 mg/mL的混合标准使用液，于﹣20℃冰箱中保存，有效期 3个月。4仪器和设备4.14.24.34.44.54.65液相色谱 -串联质谱仪，配有电喷雾离子源（ ESI源）；涡旋混合器；高速冷冻离心机：转速≥10000 r/min；电子天平：感量分别为 0.001 g和0.00001g；均质器；具塞离心管： 50 mL和 15 mL。试样制备与保存用均质器将样品充分打碎混匀，放入分装容器中，密封并标记，于﹣ 20o℃以下冷冻存放。6测定步骤6.1提取和净化称取试样1 g（精确至0.001g）于50 mL具塞离心管中，加入5.0mL水涡旋混匀1 min，再准确加入25.0 mL酸化乙腈（3.2.2），涡旋混匀3min。之后，向离心管中加入2.0g无水硫酸镁（3.1.5），1.0 g无水醋酸钠（3.1.6）。手动剧烈摇动30 s后涡旋混匀1 min。再将离心管置于离心机中，在4℃条件下以10000 r/min的速度，离心8min。取全部上清液至25 mL容量瓶中，加入酸化乙腈（3.2.2）至刻度，再从中取25 μL上清液于5 mL容量瓶中，加入甲醇水溶液（3.2.3）至刻度，取1 mL过微孔滤膜（0.22μm，聚四氟乙烯）后上机测定。6.2仪器测定6.2.1液相色谱-串联质谱检测6.2.1.1液相色谱参考条件a）色谱柱：C18液相色谱柱，100mm × 2.1 mm，粒径1.8 μm，或性能相当者；b）流动相：A为甲酸-甲酸铵缓冲溶液（3.2.1），B为乙腈（3.1.2）。梯度洗脱程序见表 1；c）流速：0.3 mL/min；d）柱温：35℃；e）进样量：5 μL。表 1梯度洗脱程序时间（min）流动相 A（%）流动相 B（%）00.13959555595955454.57959556.2.1.2质谱参考条件a）离子源：电喷雾离子源（ESI）；b）监测方式：多反应监测（MRM）；c）扫描方式：正离子模式；d）毛细管电压：3 kV；e）脱溶剂气温度：500℃；f）脱溶剂气流速：1000 L/h；g）锥孔气流速：50 L/h。目标物的定性离子、定量离子及其碰撞能量等参数见表 2。表 2质谱参数化合物母离子（m/z）锥孔电压（V）子离子（m/z）碰撞电压（eV）97.9*398.497.9*398.486709070α-茄碱869.0853.0100100α-卡茄碱注：*为定量离子6.2.2定性测定在相同试验条件下测定试