进出口食品中沙门氏菌滤膜筛选法Salmonellainfoodforimportandexport—MembramefilterscreeningmethodSN/T1059.1—2002前言本标准是按照GB/T1.1—1993《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定》进行编写的。本标准中沙门氏菌滤膜筛选法中的培养基、培养温度和滤膜法等内容是参考美国公职分析化学家协会(AOAC)《公定分析方法》9)样品制备，采用SN0170—1992《出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验方法》，并在实验的基础上编写而成。A是标准的附录。(1995年第16版17.9.0本标准的附录本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国天津出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：陈子红、侯丽萍、唐丹舟、张思传、孙俐。本标准首次发布。1范围本标准规定了进出口食品中沙门氏菌滤膜筛选法。本标准仅适用于进出口方便面、膨化食品、矿泉水、单晶糖、牛奶、饮料、禽肉、椒粒中沙门氏菌筛选。2引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。SSNN0017330—10—19992出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验方法94出口食品中微生物学检验通则3抽样按SN0330规定执行。4试验方法4.1方法原理将滤膜放入滤器，过滤样品。由于滤膜的作用而使沙门氏菌保留在膜表面上。将滤膜放在EF-18培养基上培养，沙门氏菌形成绿色、蓝绿色、蓝色或黄色菌落。444...2设备和材料22..1滤器：一套，备有预滤器。2真空泵。444444......222222......3滤膜：有机或水相，孔径0.4培养箱：346℃±1℃，432℃±1℃。7℃±1℃。5水浴箱：5℃±1℃，6吸管：L，具刻度。7玻璃三角瓶和广口瓶：L、500mL。8试管：m，玻璃制。1mL、10m250m17mm×170m 4444444444..........2222....9玻璃珠：直径5mm。1110平皿：直径1天平：感量2均质器。90mm。g。0.13培养基和试剂333...1蛋白胨-吐温80(PT)稀释液(见附录AA1)。2四硫磺酸盐肉汤(加碘和煌绿)(见附录AA2)。3EF-18琼脂(见附录AA3)。4样品制备及增菌培养4.1如为冷冻产品，应在45℃以下不超过15min，或在2℃～5℃不超过18h解冻。若不能及时检验，应置于-15℃左右保存。非冷冻而易腐的食品，置于4℃冰箱保存。4释液的起.4.2以无菌操作，称取L灭菌广口瓶，混合均匀，如pH低于)，进行前增菌；其后，移取mL转种于盛有25g(mL)样品，置于灭菌均质杯内，加入25mLPT稀释液，以L氢氧化钠溶液，调pH至mL四硫磺酸盐肉汤(加碘和煌绿)的8000～ 10000r/min均质200mLPT稀.2，放入37℃水浴培养mL灭菌广口瓶内，摇匀，42℃±1℃培养1min，放入装有4h(以增菌液达到37℃时算h，进500m6.106，用灭菌01mol/6.8±01025020h±2行选择性增菌。4.5过滤和培养将灭菌的过滤装置连接于真空抽滤瓶上，以无菌操作将无菌滤膜放在抽滤底座上，用不锈钢夹子固定。以无菌操作加滤器中，用灭菌吸管取选择性增菌液1mL放入滤器中，打开真空泵抽吸液体。再加入10mL～1510mL～20mL无菌蒸馏水于mL无菌蒸馏水抽取液体，抽干后关闭真空泵，打开底18琼脂平板表面上，滤膜与琼脂表面之间应无气泡，在42℃±1℃培养18～h，无菌落生座夹，以无菌镊子取出滤膜，将滤膜移至预先干燥好EF长则为阴性。244.6典型或可疑菌落的鉴定典型沙门氏菌菌落既不是水滴样又不是粘液状，一般呈绿色、翡翠绿色或蓝绿色，有时呈蓝色(赖氨酸阳性菌和蔗糖阴性菌)和黄色(赖氨酸阴性菌和蔗糖阳性菌)。从平板上挑选3个典型或可疑菌落，按照SN0170—1992中第4章进行生化和血清学鉴定。5报告结果55..1报告阳性结果：“沙门氏菌检出/25g”。g”。2报告阴性结果：“沙门氏菌未检出/25附录A(标准的附录)培养基和试剂A1蛋白胨-吐温80(PT)稀释液a)蛋白胨1.0gb) 吐温801c) 蒸馏水10.0000gmL将上述成分加热溶解，于121℃高压灭菌15min。AA2四硫磺酸盐肉汤(加碘和煌绿)2.1基础肉汤制备a)多价蛋白胨b)胆盐c)碳酸钙d) 硫代硫酸钠(5个分子水e)蒸馏水将上述成分混合加热煮沸5.1.1030100gggg)000mL(沉淀不会完全溶解)，冷却至45℃储存于冰箱(5℃～8℃)内备用。 AAA222.2 碘-碘化钾溶液制备g碘化钾溶解于5mL灭菌蒸馏水中，加入6g碘溶解后，用灭菌蒸馏水稀释至20mL备用。.3煌绿溶液制备将5称取煌绿染料0.1g溶解于灭菌的蒸馏水中并稀释至100mL，备用。.4使用在使用的当天，将1720mL碘 碘化钾溶液，10mm灭菌的试管内，不要加热，使用前保持温度在2mL煌绿溶液加入1000mL基础肉汤中，缓慢震荡将沉淀悬浮起来。并以无菌操作以10mL分装于175℃～35℃。mAm3×0EF-18琼脂a)蛋白胨)酵母浸膏5.3.102.15