出口肉及肉制品中卡巴氧残留量检验方法气相色谱法Methodforthedeterminationofcarbadoxresiduesinmeatsandmeatproductsforexport—GaschromatographySN/T1016.1—2001前言本标准是按照GB/T1.1—1993《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定》及SN/T0001—1995《出口商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定》的要求编写的，其中测定方法是参考国内外有关文献，经研究、改进和验证后制定的。本标准同时制定了抽样和制样方法。测定低限是根据国际上对肉及肉制品中卡巴氧及其代谢物残留量的最高限量和测定方法的灵敏度而制定的。本标准的附录A是提示的附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。本标准主要起草人：郑自强、唐红芳、朱晓雨、朱宏、丁慧瑛。本标准首次发布。1范围本标准规定了出口肉及肉制品中卡巴氧残留量检验的抽样、制样和气相色谱测定方法。本标准适用于出口猪肉中卡巴氧代谢物(喹喔啉-2-羧酸)残留量的检验。2抽样和制样2.1检验批以不超过2500件为一检验批。同一检验批的商品应具有相同的特征。如包装、标记、产地、规格和等级。2.2抽样数量批量/件最低抽样数/件1～25126～100510251～255000101517201～501～10001001～25002.3抽样方法.2规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。每件中取一袋作为原始样品，其总量不少于2kg。放入清洁容器内，加封后，标明标记，及时送交按2实验室。如每件中无小包，或有小包装但每袋质量超过2kg者，可用灭菌锋利刀在抽出的包件中，每件割取不少于100g，混合后置于洁净容器内，作为混合原始样。混合原始样的质量不少于2kg。加封后，标明标记，及时送交实验室。2.4试样制备从所取全部样品中取出有代表性样品约1kg，取可食部分经捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器内作为试样。密封并标明标记。2.5试样保存将试样于-18℃以下冷冻保存。注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。3测定方法 3.1方法提要用碱水解法将卡巴氧代谢物［喹喔啉-2-羧酸(QC离。用乙酸乙酯抽提柱洗脱液，浓缩提取液，用甲醇化的硫酸使A)］从样品中分离出来，接着用乙酸乙酯抽提并用pH6.0缓冲液反抽提，用离子排斥色谱法分A衍生化，所得甲酯衍生物经再抽提后用电子俘获气相色谱法测定，外标法定量。QC3.2试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为蒸馏水。3333....2222....1甲醇。2浓硫酸。3乙酸乙酯。4柠檬酸：CＨＯ·ＨＯ。687233333333333...........22222222222...........5氢氧化钠。6浓盐酸。7盐酸溶液：8氢氧化钠溶液：9柠檬酸溶液：1mol/L，用水稀释8312.0.3mL浓盐酸至1000mL。3mol/L，溶解0g氢氧化钠于适量水中并稀释至1000mLmL。1mol/L，溶解)：)：用水稀释21g柠檬酸一水合物于1000mL水中。1111110柠檬酸缓冲液(pH6.00.5mol/L，用5mol/L氢氧化钠溶液(约5.5)调节100mL1mol/L柠檬酸溶液至pH6.0，加水到200mL。1甲醇-水(10+9010mL甲醇至100mL。2甲醇-硫酸(97+351)：用经无水硫酸钠干燥过的甲醇稀释3.0mL浓硫酸至100mL。当天制备，在加入酸以前将甲醇用冰浴冷却。3无水硫酸钠：0树脂：5喹喔啉-2-羧酸6喹喔啉-2-羧酸标准溶液：准确称取适量的喹喔啉-2-羧酸标准品，用甲醇配成浓度为60℃灼烧4h，置于干燥器中备用。4AGMP-500目～200目。(QCA)标准品：已知纯度≥97%。3.2.1100μｇL喹喔啉-2-羧酸的标准储备液，根据需要再用甲醇稀释储备液，配成适当浓度的标准工作液。3333333333..........3仪器和设备333333333.........1气相色谱仪：配有电子俘获检测器。2组织捣碎机。3离心机。4分液漏斗：125mL。5旋转蒸发器，具温控水浴。6浓缩瓶：215050mmL。L。7锥形瓶：8离心管：具塞，10cmL、25mL。9离子排斥柱：25m×10mm(id(1cm高，并用玻璃棉盖住树脂床。保持液面在树脂的上面。)玻璃柱，下端垫一小团玻璃棉。将7.0gAGMP-5000目～200目)树脂于1mol/L盐酸中调成浆，并将其移入柱中，用一根玻璃棒将柱子装填至1033..4测定步骤4.1提取和净化 称取约5g样品(精确到0.1g)于150mL三角瓶中，加10.0mL3mol/L氢氧化钠溶液，松松加塞，将其置于100℃水浴中，加热30min，浴中水浴面应高于组织试样。将碱性水解产物于冰浴中冷却，用54mL浓盐酸酸化至pH≤1(至酸碱试纸呈深红色)。于酸化的水解产物中加30mL乙酸乙酯，加塞，振摇提取30s，静置分层，s，静置分层，将上层液体滤入一12将上层液体并入分液漏斗中。静置分层，弃去水相。mL分液漏斗中。待分层后，将下层水相