中华人民共和国国家标准GB 5009.24—2010食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素 M1和B1的测定 National food safety standard Determination of aflatoxins M1 and B1 in foods 2010-03-26发布2010-06-01实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发布 GB5009.24—2010前言本标准代替 GB/T 5009.24-2003《食品中黄曲霉毒素 M1与B1的测定方法》。本标准所代替的历次版本发布情况为：——GB/T 5009.24-1985、GB/T 5009.24-1996、GB/T 5009.24-2003。I? GB5009.24—2010食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定1范围本标准规定了牛乳及其制品、奶油及新鲜猪组织（肝、肾、血及瘦肉）等食品中黄曲霉毒素 M1与B1的测定方法。本标准适用于牛乳及其制品、奶油及新鲜猪组织（肝、肾、血及瘦肉）等食品中黄曲霉毒素 M1与B1的测定。2原理样品经提取、浓缩、薄层分离后，黄曲霉毒素 M1 与 B1 在紫外光（波长 365nm）下产生蓝紫色荧光，根据其在薄层上显示荧光的最低检出量来测定含量。3试剂和材料3.1甲醇：分析纯。3.2石油醚：分析纯。3.3三氯甲烷：分析纯。3.4无水硫酸钠：分析纯。3.5异丙醇：分析纯。3.6硅胶 G：层析用。3.7氯化钠及氯化钠溶液（40 g/L）。3.8硫酸（1+3）。3.9玻璃砂：用酸处理后洗净干燥，约相当 20目。3.10黄曲霉毒素 M1 标准溶液：用三氯甲烷配制成每毫升相当于10μg 的黄曲霉毒素 M1标准溶液。以三氯甲烷作空白试剂，黄曲霉毒素 M1的紫外最大吸收峰的波长应接近357nm，摩尔消光系数为19950。避光，置于 4℃冰箱中保存。3.11黄曲霉毒素 M1与B1混合标准使用液：用三氯甲烷配制成每毫升相当于各含 0.04 μg黄曲霉毒素M1与B1。避光，置于 4℃冰箱中保存。4仪器和设备4.110目圆孔筛。4.2小型粉碎机。1 GB5009.24—20104.3玻璃板：5 cm×20 cm。4.4展开槽: 长 25 cm，宽6 cm，高 4 cm。4.5紫外光灯：100 W～125 W，带 365 nm滤光片。4.6微量注射器。5分析步骤整个操作需在暗室条件下进行。5.1样品提取5.1.1样品提取制备表，见表 1。表1 试样制备加40g/L氯化钠提取液量 α/（mL）称样量/（g）加水量/（mL）加甲醇量/（mL）浓缩体积/（mL）滴加体积/（μL）方法灵敏度/样品名称溶液量/（μg/kg）（mL）25牛乳炼乳303015151030303030009090909055909090906252595680596158610.40.40.40.40.40.40.40.40.410050404040505050500.10.20.50.50.50.20.20.20.235牛乳粉乳酪2052831奶油4500猪肝28猪肾026猪瘦肉猪血029026α 提取液量按式（1）计算：X =8 ×(90+A+ B)………………………………………………… （1）15式中：X——提取液量，单位为毫升（mL）；A——试样中的水分量，单位为毫升（mL）（牛乳、炼乳及猪组织的取样量为 30g，牛乳粉、乳酪的取样量为 15g）；B——加水量，单位为毫升（mL)；注：样品中的水分量参照《食物成分表》。因各提取液中含 48 mL甲醇，需39 mL水才能调到甲醇与水之体积比为(55+45)，因此加入氯化钠溶液(40g/L) 量等于(87 mL)减去提取液量（mL）。5.1.2乳与炼乳：称取 30.00 g混匀的样品，置于小烧杯中，再分别用90 mL甲醇移于300mL具塞锥形瓶中，盖严防漏。振荡 30 min，用折叠式快速滤纸滤于 100 mL具塞量筒中。按表1收集62 mL乳与52 mL炼乳（各相当于16 g样品）提取液。5.1.3乳粉：取 15.00 g样品，置于具塞锥形瓶中，加入20 mL水，使样品湿润后再加入90 mL甲醇，以下按 5.1.3自“振荡30 min……”起，依法操作，按表 1收集59 mL提取液（相当于8 g样品）。5.1.4干酪：称取 15.00g切细、过10目圆孔筛混匀样品，置于具塞锥形瓶中，加5 mL水和90mL甲醇，以下按 5.1.3自“振荡30 min……”起依法操作，按表 1收集56 mL提取液（相当于8 g样品）。5.1.5奶油：称取 10.00g样品，置于小烧杯中，用40mL石油醚将奶油溶解并移于具塞锥形瓶中。加 45 mL水和55mL甲醇，振荡30 min后，将全部液体移于分液漏斗中。再加入1.5g氯化钠摇动溶2 GB5009.24—2010解，待分层后，按上表收集 80 mL提取液（相当于8 g样品）于具塞量筒中。5.1.6新鲜猪组织：取新鲜或冷冻保存的猪组织样品（包括肝、肾、血、瘦肉）先切细，混匀后称取30.00 g，置于小乳钵中，加玻璃砂少许磨细，新鲜全血用打碎机打匀，或用玻璃珠振摇抗凝。混匀后称取 30.00 g，将各样品置于 300 mL具塞锥形瓶中，加入90 mL甲醇，以下按5.1.3自“振荡30 min……”起依法操作。按上表收集 59 mL猪肝，61 mL猪肾，58mL猪瘦肉及 61 mL猪血等提取液（各相当于16 g样品）。5.2净化5.2.1用石油醚分配净化：将以上收集的提取液移入 250mL分液漏斗中，再按各种食品加入一定体积的氯化钠溶液（40 g/L）（见表 1）。再加入 40 mL石油醚，振摇2min，待分层后，将下层甲醇-氯化钠水层移于原量筒中，将上层石油醚溶液从分液漏斗上