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中华人民共和国国家标准GB 5009.24—2010食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素 M1和B1的测定 National food safety standard Determination of aflatoxins M1 and B1 in foods 2010-03-26发布2010-06-01实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发布 GB5009.24—2010前言本标准代替 GB/T 5009.24-2003《食品中黄曲霉毒素 M1与B1的测定方法》。本标准所代替的历次版本发布情况为:——GB/T 5009.24-1985、GB/T 5009.24-1996、GB/T 5009.24-2003。I? GB5009.24—2010食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定1范围本标准规定了牛乳及其制品、奶油及新鲜猪组织(肝、肾、血及瘦肉)等食品中黄曲霉毒素 M1与B1的测定方法。本标准适用于牛乳及其制品、奶油及新鲜猪组织(肝、肾、血及瘦肉)等食品中黄曲霉毒素 M1与B1的测定。2原理样品经提取、浓缩、薄层分离后,黄曲霉毒素 M1 与 B1 在紫外光(波长 365nm)下产生蓝紫色荧光,根据其在薄层上显示荧光的最低检出量来测定含量。3试剂和材料3.1甲醇:分析纯。3.2石油醚:分析纯。3.3三氯甲烷:分析纯。3.4无水硫酸钠:分析纯。3.5异丙醇:分析纯。3.6硅胶 G:层析用。3.7氯化钠及氯化钠溶液(40 g/L)。3.8硫酸(1+3)。3.9玻璃砂:用酸处理后洗净干燥,约相当 20目。3.10黄曲霉毒素 M1 标准溶液:用三氯甲烷配制成每毫升相当于10μg 的黄曲霉毒素 M1标准溶液。以三氯甲烷作空白试剂,黄曲霉毒素 M1的紫外最大吸收峰的波长应接近357nm,摩尔消光系数为19950。避光,置于 4℃冰箱中保存。3.11黄曲霉毒素 M1与B1混合标准使用液:用三氯甲烷配制成每毫升相当于各含 0.04 μg黄曲霉毒素M1与B1。避光,置于 4℃冰箱中保存。4仪器和设备4.110目圆孔筛。4.2小型粉碎机。1 GB5009.24—20104.3玻璃板:5 cm×20 cm。4.4展开槽: 长 25 cm,宽6 cm,高 4 cm。4.5紫外光灯:100 W~125 W,带 365 nm滤光片。4.6微量注射器。5分析步骤整个操作需在暗室条件下进行。5.1样品提取5.1.1样品提取制备表,见表 1。表1 试样制备加40g/L氯化钠提取液量 α/(mL)称样量/(g)加水量/(mL)加甲醇量/(mL)浓缩体积/(mL)滴加体积/(μL)方法灵敏度/样品名称溶液量/(μg/kg)(mL)25牛乳炼乳303015151030303030009090909055909090906252595680596158610.40.40.40.40.40.40.40.40.410050404040505050500.10.20.50.50.50.20.20.20.235牛乳粉乳酪2052831奶油4500猪肝28猪肾026猪瘦肉猪血029026α 提取液量按式(1)计算:X =8 ×(90+A+ B)………………………………………………… (1)15式中:X——提取液量,单位为毫升(mL);A——试样中的水分量,单位为毫升(mL)(牛乳、炼乳及猪组织的取样量为 30g,牛乳粉、乳酪的取样量为 15g);B——加水量,单位为毫升(mL);注:样品中的水分量参照《食物成分表》。因各提取液中含 48 mL甲醇,需39 mL水才能调到甲醇与水之体积比为(55+45),因此加入氯化钠溶液(40g/L) 量等于(87 mL)减去提取液量(mL)。5.1.2乳与炼乳:称取 30.00 g混匀的样品,置于小烧杯中,再分别用90 mL甲醇移于300mL具塞锥形瓶中,盖严防漏。振荡 30 min,用折叠式快速滤纸滤于 100 mL具塞量筒中。按表1收集62 mL乳与52 mL炼乳(各相当于16 g样品)提取液。5.1.3乳粉:取 15.00 g样品,置于具塞锥形瓶中,加入20 mL水,使样品湿润后再加入90 mL甲醇,以下按 5.1.3自“振荡30 min……”起,依法操作,按表 1收集59 mL提取液(相当于8 g样品)。5.1.4干酪:称取 15.00g切细、过10目圆孔筛混匀样品,置于具塞锥形瓶中,加5 mL水和90mL甲醇,以下按 5.1.3自“振荡30 min……”起依法操作,按表 1收集56 mL提取液(相当于8 g样品)。5.1.5奶油:称取 10.00g样品,置于小烧杯中,用40mL石油醚将奶油溶解并移于具塞锥形瓶中。加 45 mL水和55mL甲醇,振荡30 min后,将全部液体移于分液漏斗中。再加入1.5g氯化钠摇动溶2 GB5009.24—2010解,待分层后,按上表收集 80 mL提取液(相当于8 g样品)于具塞量筒中。5.1.6新鲜猪组织:取新鲜或冷冻保存的猪组织样品(包括肝、肾、血、瘦肉)先切细,混匀后称取30.00 g,置于小乳钵中,加玻璃砂少许磨细,新鲜全血用打碎机打匀,或用玻璃珠振摇抗凝。混匀后称取 30.00 g,将各样品置于 300 mL具塞锥形瓶中,加入90 mL甲醇,以下按5.1.3自“振荡30 min……”起依法操作。按上表收集 59 mL猪肝,61 mL猪肾,58mL猪瘦肉及 61 mL猪血等提取液(各相当于16 g样品)。5.2净化5.2.1用石油醚分配净化:将以上收集的提取液移入 250mL分液漏斗中,再按各种食品加入一定体积的氯化钠溶液(40 g/L)(见表 1)。再加入 40 mL石油醚,振摇2min,待分层后,将下层甲醇-氯化钠水层移于原量筒中,将上层石油醚溶液从分液漏斗上