................................................................................................................................I 缩略词表........................................................................................................,......m 1.前言............................................................................................................................1 1.1细菌细胞表面展示及其应用..........................................................................1 1.1.1细菌细胞表面展示...........................#,1 1.1.2细菌表面展示系统的应用...................................................................2 1.25一层蛋白及其在疫苗研制中的应用...............................................................2 1.2.15一层蛋白及其功能.....................................2 1.2.25一层蛋白在疫苗研制中的应用.............................................................4 1.2.3苏云金芽胞杆菌杆菌S一层蛋白CTC表面展示系统.........................5 1.3疫苗食品及其应用....................................................5 1.4蜡样芽胞杆菌及其应用....................7 1.4.1蜡样芽胞杆菌作为益生素的作用机理...............................................7 1.4.1.1生物夺氧..........................................................................#7 1.4.1.2拮抗致病微生物,改善体内外生态环境.................................7 1.4.1.3增强动物体的免疫功能.............................................................7 1.4.1.4产生多种消化酶........................................#8 1.4.1.5产生多种营养物质.....................................................................8 1.4.1.6促进动物肠道发育和成熟并降低血脂和胆固醇.....................8 1.4.2蜡样芽胞杆菌在畜牧业中的应用效果...............................................8 1.5研究的目的和意义......................................................9 2材料与方法...............................................................................................................9 2.1实验材料..........................................................................................................9 2.1.1实验动物............................................................................................#.9 2.1.2主要仪器..............................................................................................10 2.1.3质粒和菌株.......................................................................................#10 2.1.4主要试剂及溶液的配制......................................................................12 2.1.4.1抗生素类.............................................................................12 2.1.4.2细菌培养主要溶液的配制................:................................12华中农业人学2009届硕卜学位报告 2.1.4.3质粒抽提与鉴定相关溶液的配制............................................13 2.1.4.4电转化相关溶液的配置.............................................................13 2.1.4.5SDS聚丙烯酞胺凝胶电泳溶液.................................................13 2.1.4.6W七Stem一blot相关溶液...............................................................14 2.1.4.7阳性血清的来源........................................................................15 2.2试验方法........................................................................................................巧 2.2.1技术路线.....................................,...................................................巧 2.2.2革兰氏阴性菌质粒的小量制备(碱裂解法提取质粒)...........,巧 2.2.3革兰氏阳性菌质粒的小量制备(根据碱裂解法修改)..................16 2.2.4PCR扩增HAIP基因..........................................................................16 2.2.5苏云金芽胞杆菌!蜡样芽胞杆菌电转感受态的制备及电转化.......17 2.2.6电镜样品的制备...................................................................................18 2.2.7展示HAI蛋白的重组菌株BCCH!CH血凝和血凝抑制试验......18 2.2.7.1菌悬液的制备............................................................................18 2.2.7.2血凝(HA,hemagglutination)试验方法.....................................18 2.2.7.3血凝抑制(Hl,hemaggiutinatinninhibition)试验方法..............18 2.2.8SDS一PAGE电泳..,!.............................................................................18 2.2.9Westemblot..........................................................................................19 2.3展示HAI蛋白的重组菌株BcA和BcC免疫鸡实验...............................20 2.3.1免疫抗原的制备..................................................................................20 2.3.2动物实验......................................,.................................................20 2.3.3血清抗体效价测定..............................................................................20 3结果与分析..............................................................................................................20 3.1质粒PCSHAIP!PCTC一HAIP和PMIL一CSA的提取.................................20 3.2重组菌株的构建............................................................................................21 3.3重组菌株菌落形态的差异............................................................................23 3.4重组菌株的电子显微镜照片........................................................................24 3.5重组菌株BcA和BcC的血凝和血凝抑制试验.........................................24 3.6融合蛋白的表达和活性检测.........................................................................26 3.7重组菌株对商品代肉雏鸡的免疫效果.........................................................27 4讨论..........................................................................................................................28外源抗原在蜡样芽胞杆菌细胞表面展示的可行性研究 4.1蜡样芽胞杆菌的电转化.:........................................................................28 4.2蜡样芽胞杆菌与苏云金芽胞杆菌展示外源抗原的比较............................28 5结论.......,.,.....................................................................................................29