ICS11.020WS中华人民共和国卫生行业标准C62WS/T569—2017疟原虫检测血涂片镜检法Microscopic examination of blood films for malaria parasites2017-08-01发布2018-02-01实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 发布WS/T 569—2017前言本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草本标准起草单位：海南省疾病预防控制中心江苏省寄生虫病防治研究所中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所云南省寄生虫病防治所海南省农垦总局医院本标准主要起草人：王善青高琪汤林华杨恒林郑彬胡锡敏王光泽李雨春刘莹欧阳范献IWS/T 569—2017疟原虫检测血涂片镜检法1范围本标准规定了血涂片镜检法检测疟原虫的技术规范本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对疟原虫的显微镜检测2术语和定义下列术语和定义适用于本文件2.1疟原虫Plasmodium spp疟原虫是一类单细胞寄生性的真核动物是疟疾（malaria）的病原体寄生于人体的疟原虫主要有恶性疟原虫（Plasmodiumfalciparum）间日疟原虫（Plasmodiumvivax）三日疟原虫（Plasmodiummalariae）和卵形疟原虫（Plasmodium ovale）等2.2血涂片 blood films将血液涂制于载玻片上制成的涂片供显微镜疟原虫检查用的血涂片包括厚血膜涂片和薄血膜涂片两种3仪器和器材3.13.23.33.43.53.63.73.8生物显微镜（100×油浸物镜5×或10×目镜）计数器载玻片（无划痕无油污的洁净载玻片）推片血片染色架血片干燥架玻片盒染色盘和染色缸4试剂和材料1WS/T 569—20174.1吉氏染色原液4.2pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）4.34.44.5甲醇（分析纯）香柏油或专用浸油（折射率≥1.5）二甲苯（分析纯）4.675%酒精4.74.8一次性采血针一次性手套5检测步骤5.1血涂片的制作5.1.1采血部位及取血方法经75%乙醇消毒采血部位待干后用一次性采血针在耳垂或指端扎刺取血婴儿可从拇趾或足跟扎刺取血取1张已消毒推片用拇指和食指夹持推片侧缘中部用推片左下角刮取血液4μL5μL用于制作厚血膜再用该端中部刮取血液1μL1.5μL用于制作薄血膜5.1.2厚血膜制作取1张载玻片将推片左下角的血滴涂于载玻片的中央偏左由里向外划圈涂成直径0.8cm1.0cm的圆形厚血膜,厚度以1个油镜视野内可见到5个10个白细胞为宜5.1.3薄血膜制作用干棉球抹净推片左下角上的血渍然后将推片下缘平抵载玻片的中线当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时使2张玻片保持25°35°从右向左迅速向前推成舌状薄血膜每张载玻片上1个厚血膜和1个薄血膜（参见附录A）5.1.4编号血膜制好后水平放置充分干燥后用铅笔在玻片一侧毛玻璃上或在薄血膜上编号5.2固定与溶血5.2.1薄血膜固定将薄血膜一端朝下呈45°用棉签蘸取甲醇溶液均匀轻抹于薄血膜表面避免碰触厚血膜5.2.2厚血膜溶血在干燥的厚血膜上滴加蒸馏水数滴完全覆盖血膜溶血数分钟待血膜呈浅灰色倾去溶血液厚血膜制作后1d内染色无需溶血超过1d的应溶血5.3吉氏染色2WS/T 569—20175.3.1吉氏染液的配制（参见附录 B）吉氏染液包括吉氏染液原液和吉氏染液工作液吉氏染液原液由5g吉氏粉加250mL甘油充分研磨后加入250mL甲醇配制吉氏染液原液在避光条件下可长期保存常用的吉氏染液工作液包括2%3%和10%浓度三种分别由吉氏染液原液和pH 7.2磷酸盐缓冲液（PBS）按比例配制吉氏染液工作液只能使用时新鲜配制5.3.2单张血涂片染色（参见附录 C）单张血涂片吉氏染色常用于临床疟疾患者的显微镜疟原虫检测采用 3%吉氏染液的常规染色方法血涂片染色质量较好可长期保存染色时间约30min采用10%吉氏染液的快速染色方法染色时间较短8 min10min但血涂片不适合长期保存5.3.3成批血涂片染色（参见附录 C）成批血涂片吉氏染色常用于人群流行病学调查中的显微镜疟原虫检测常采用 2%吉氏染液进行批