中华人民共和国国家标准GB5009.222—2016食品安全国家标准食品中桔青霉素的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局发布GB5009.222—2016前言本标准代替 /GBT5009.222—2008《红曲类产品中桔青霉素的测定 》SN/T2426—2010《进出口粮液相色谱法》和SN/T2916—2011《出口食品中桔霉素的测定方法免疫亲和柱净化-高效液相色谱法 》本标准与 /谷中桔霉素含量检测方法GBT5009.222—2008相比,主要变化如下 :———标准名称修改为 “食品安全国家标准 食品中桔青霉素的测定 ”;———增加了净化步骤 ;———增加了适用范围 ⅠGB5009.222—2016食品安全国家标准食品中桔青霉素的测定范围1本标准规定了食品中桔青霉素的测定方法本标准第一法适用于大米 玉米辣椒红曲类产品中桔青霉素的测定,第二法适用于大米 大麦燕麦小麦中桔青霉素的测定 第一法免疫亲和柱净化 -高效液相色谱法原理2试样中的桔青霉素用甲醇 -水提取,提取液经过滤稀释后,用免疫亲和柱净化,采用液相色谱结合荧光检测器测定桔青霉素的含量 ,外标法定量试剂和材料3除非另有说明 ,本方法所用试剂均为分析纯 ,水为GB6682规定的二级水 试剂3.1甲醇():色谱纯CHOH33.1.13.1.23.1.33.1.43.1.5乙腈( ):色谱纯CHCN3磷酸( ):色谱纯HPO34冰乙酸():色谱纯CHO2 42氢氧化钠(NaOH)吐温()3.1.6 20CHO58 11426氯化钠(NaCl)3.1.73.1.83.1.93.1.10磷酸氢二钠()4NaHPO2磷酸二氢钾()4KHPO2氯化钾(KCl)试剂配制3.23.2.1氢氧化钠溶液(2molL/):称取80.0g固体氢氧化钠 ,溶于1L水中3.2.2磷酸溶液(10mmolLpH7.5/, ):准确移取1.376mL磷酸加水定容至 2000mL,用2molL/的氢氧化钠溶液调节 pH至7.53.2.3磷酸溶液(10mmolLpH2.5/, ):准确移取1.376mL磷酸加水定容至 2000mL,用2molL/的氢氧化钠溶液调节 pH至2.53.2.4 PBS缓冲溶液:称取8.0g氯化钠1.2g磷酸氢二钠0.2g磷酸二氢钾0.2g氯化钾,用水溶解,1GB5009.222—2016调节pH至7.0,用水定容至1000mL3.2.5 0.1%吐温20-PBS溶液:准确移取1mL吐温20以PBS缓冲溶液定容至1000mL3.2.6 0.1%磷酸溶液:准确移取1mL磷酸加水定容至 1000mL洗脱液 :甲醇/磷酸溶液(pH2.5)(70+30)3.2.8洗脱液Ⅱ:甲醇-0.1%磷酸溶液(70+30)3.2.7Ⅰ-10mmolL标准品3.3桔青霉素(C13H14O5,CAS号:518-75-2),纯度≥99.0%或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质标准溶液配制3.4标准储备液:准确称取一定量的桔青霉素标准品,以甲醇溶解并定容至 10.0mL作为标准储备3.4.1液,浓度为/ ,于100gmL4℃下保存μ标准中间液:准确移取1.0mL桔青霉素标准储备液于10mL容量瓶中,用甲醇定容, 浓度为3.4.210μgmL/ ,于4℃下保存基质标准工作液 :根据需要,取适量的标准中间液 ,用空白样品提取液配成不同浓度的基质标准3.4.3工作液,现用现配材料3.5桔青霉素免疫亲和柱 :柱体积3mL,最大柱容量20ng,或等效柱3.5.13.5.2玻璃纤维滤纸 :直径11cm,孔径1.5μm仪器和设备4高效液相色谱仪 ,配荧光检测器 4.14.2分析天平:感量0.0001g和0.01g高速均质器:≥12000rmin/混匀器4.34.4分析步骤提取55.1大米玉米辣椒5.1.1称取经充分粉碎均质试样10.0g(精确至0.1g)于150mL具塞锥形瓶中,加入50mL甲醇-水(70+30)提取液,以高速均质器高速均质提取 2min,过滤提取液,移取1.0mL滤液,置于另一干净的容器中,加入49