ICS11.220DB34B 41安徽省地方标准DB 34/T 3284—2018 猪丹毒丝菌实时荧光PCR检测方法 Method of the real-time PCR for the detection of Erysipelothrix rhusiopathiae2018-12-29发布2019-01-29实施安徽省市场监督管理局发 布 DB34/T 3284—2018前言本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草本标准由安徽农业大学提出本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口本标准起草单位：安徽农业大学安徽浩翔农牧有限公司安徽省动物卫生监督所巢湖市畜牧兽医局阜阳市动物卫生监督所合肥市动物疫病预防与控制中心安徽省兽药饲料监察所同济大学本标准主要起草人：李郁李雪松李春芬张利亚陈章黄晓慧孙裴姚焱彬张劲松高亚飞孟天恺I DB34/T 3284—2018猪丹毒丝菌实时荧光PCR检测方法1范围本标准规定了猪丹毒丝菌实时荧光 PCR 检测方法的缩略语试剂和仪器样品的采集运输与保存操作方法本标准适用于猪组织样品血样及其细菌培养物中猪丹毒丝菌的实时荧光 PCR 检测2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅所注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3缩略语下列缩略语适用于本文件荧光 PCR：荧光聚合酶链式反应Ct 值：每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值时所经历的循环圈数DNA：脱氧核糖核酸Taq 酶：Taq DNA 聚合酶PBS：磷酸盐缓冲液Eppendorf 管：微量离心管4试剂和仪器4.1试剂4.1.1无水乙醇: -20℃预冷4.1.275％乙醇: 用新开启的无水乙醇和无 DNA 酶的灭菌双蒸水配制-20℃预冷4.1.3灭菌双蒸水4.1.4动物组织基因组DNA提取试剂盒4.1.5引物：——上游引物：5′-GTGGCGCATATAATCCCGTA- 3′——下游引物：5′- GCAAACGCAATGGCTTCT- 3′4.1.62×TransTaq-T PCR SuperMix4.1.7Taq酶4.1.8实验用水：应符合 GB/T 6682 中一级水的规格4.2仪器1