ICS11.220DB34B 41安徽省地方标准DB 34/T 3283—2018 副猪嗜血杆菌的分子分型MLST方法 Multilocus sequence typing detection method for Haemophilus parasuis2018-12-29发布2019-01-29实施安徽省市场监督管理局发 布 DB34/T 3283—2018前言本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草本标准由安徽农业大学提出本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口本标准起草单位：安徽农业大学安徽浩翔农牧有限公司安徽省动物卫生监督所阜阳市动物卫生监督所合肥市动物疫病预防与控制中心安徽省兽药饲料监察所同济大学本标准主要起草人：李郁陈章李雪松张利亚黄晓慧刘晓露孙裴汪清峰张劲松高亚飞孟天恺I DB34/T 3283—2018副猪嗜血杆菌的分子分型MLST方法1范围本标准规定了副猪嗜血杆菌的分子分型 MLST 的术语和定义试剂和材料仪器和设备操作步骤生物安全及防污染措施本标准适用于副猪嗜血杆菌的分子分型检测2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅所注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB 19489实验室 生物安全通用要求GB/T 27401实验室质量控制规范 动物检疫NY/T 2417副猪嗜血杆菌 PCR 检测方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1管家基因house-keeping genes所有细胞中均要表达的一类基因其产物是维持细胞生命活动所必需的其基因序列高度保守并且在大多数情况下持续表达4试剂和材料除有特殊说明外所有实验用试剂均为分析纯；实验用水符合 GB/T 6682 中一级水的要求所有试剂均用无 DNA 酶污染的容器分装4.1细菌基因组DNA提取试剂盒4.2普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒4.3Taq DNA酶4.4dNTP：dATPdTTPdCTPdGTP4.5引物：扩增引物和测序引物序列见附录A表A.24.610×PCR缓冲液：200 mmoI/L Tris-HCl （pH 8.4）200 mmol/L氯化钾15mmol/L氯化镁4.7琼脂糖凝胶4.8Gelred核酸染色剂4.96×溴酚蓝上样缓冲液1