ICS65.020.20B05DB32备案号：58094-2018江苏省地方标准DB 32/T3358—2018红花石蒜组培快繁技术规程Technical regulation for tissue culture of Lycoris radiata2018-2-10发布2018-3-10实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T3358—2018前??言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草本标准的附录A附录B均为资料性附录本标准由江苏省中国科学院植物研究所提出并归口本标准起草单位：江苏省中国科学院植物研究所本标准主要起草人：汪仁江玉梅贺佳徐晟李晓丹李宜奎夏冰彭峰IDB32/T3358—2018红花石蒜组培快繁技术规程1范围本标准规定了红花石蒜（Lycoris radiata）外植体采集与处理培养基配置外植体接种组织培养炼苗移栽移栽苗管理和记录等技术要求本标准适用于红花石蒜组培苗的生产2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件GB/T 6001育苗技术规程LY/T 1000容器育苗技术3外植体采集与处理3.1外植体采集3.1.1在3月~10月选择晴天的天气采集表面无损的鳞茎作为外植体3.1.2将红花石蒜周围约30cm的土壤挖开用手刨出鳞茎球拨掉球茎所带的泥土采集完球茎后覆土填平3.2外植体处理3.3.1剪去红花石蒜鳞茎球根部剥去外层鳞茎片带鳞茎盘切成长为 2 cm~3 cm的鳞茎片放入烧杯中用 1%洗衣粉溶液浸泡 5 min然后流水冲洗 1 h~2 h最后用蒸馏水冲洗转至超净工作台3.3.2在超净工作台上用配制好的75%乙醇浸泡 30 s然后用无菌水冲洗 2次~3次3.3.3配制终浓度为1%的次氯酸钠消毒液用其浸泡材料 30 min后用无菌水冲洗5次~6次并用无菌滤纸吸干水分后备用4培养基配制4.1MS培养基母液配制4.1.1制作培养基前需先配制培养基母液MS培养基母液配制比例参见附录 A4.1.2母液配制应用蒸馏水4.1.3配制大量元素母液时每个组分单独溶解避免沉淀发生1DB32/T3358—20184.1.4配制后的母液应置于 4℃冰箱中冷藏保存微量元素母液用棕色瓶盛装保存母液配制后应及时使用贮存时间不宜超过 3个月4.1.5母液容器上应贴好标签注明名称配制日期发现母液中有沉淀或絮状物出现应停止使用4.2植物生长调节物质母液配制植物生长调节物质母液的配制浓度为 0.5mg/mL其配制方法参见附录 B母液配制好后滤膜过滤除菌滤液贴好标签并置于 4℃冰箱中冷藏保存期不超过 3个月4.3培养基选择诱导培养基为： MS+6-BA 3.0mg/L+NAA0.2mg/L；增殖培养基： MS+6-BA5.0mg/L+2,4-D1.0mg/L+NAA 0.5mg/L；生根培养基：MS+IBA 1.0mg/L4.4培养基制作4.4.1准备好配制容器（1L烧杯玻璃棒和量筒）蒸馏水琼脂粉蔗糖和各类母液等4.4.2先用烧杯盛有少量蒸馏水参考用量参见附表A4.4.3按蔗糖浓度30g/L计算用量称量后用蒸馏水溶解然后用容量瓶定容4.4.4根据培养基的选择加入植物生长调节物质玻璃棒搅拌均匀用pH计测试酸碱度调节pH值至5.6~5.84.4.5将称量好的琼脂粉（6g/L~7g/L）加入烧杯中加热搅拌至完全溶解4.4.6分装时不应将培养基倾倒在培养瓶瓶口分装后立即用瓶盖盖上并旋紧4.5培养基灭菌4.5.1将分装好的盛有培养基的培养瓶放入高压蒸汽灭菌锅内打开冷凝阀排尽灭菌锅内的冷空气当气压达到 0.1Mpa温度升至 121℃时开始计时保持温度并进行压力灭菌 20min4.5.2关闭灭菌锅电源以慢排方式排放热气待灭菌锅内的气压表指针降至0时再打开高压灭菌锅盖取出培养基将培养基平放置于接种室或培养室内进行冷却4.6培养基保存灭菌后的培养基应注明培养编号及配制日期同时按培养基种类配制先后顺序分别储存于接种室或培养室储存时间不宜超过 2周5外植体接种5.1接种环境接种前接种室和超净工作台内要进行紫外线消毒20m