ICS65.020.20B61DB32备案号：56880-2017江苏省地方标准DB 32/T3306—2017蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程Technique regulation for the Virus-free plantlet production of Blueberry2017-09-25发布2017-10-25实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T3306—2017前??言本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构及编写》给出的规则编写本标准由江苏农林职业技术学院提出并归口本标准由江苏农林职业技术学院起草本标准主要起草人：王永平宗树斌刘玉华许建民王珊任焕焕IDB32/T3306—2017蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程1范围本标准规定了蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程的脱毒外植体消毒初代培养病毒检测继代培养壮苗培养驯化生根上钵苗期管理生产记录等本标准适用于全省蓝莓组培脱毒种苗的生产2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件GB/T 8321(所有部分)农药合理使用准则3脱毒3.1母株选择具有品种典型特征特性生长势强目测无病症的优良单株3.2热处理钝化病毒取母株的侧枝嫩梢放入病毒钝化处理器60℃热击10s4外植体消毒将经热处理的嫩梢剪取放入烧杯纱布封口自来水冲洗30 min60 min用75%乙醇浸润130 s后用无菌水洗净再放入5%10%的NaClO溶液中浸泡10min15 min后用无菌水冲洗5次再用无菌滤纸吸去表面水分置于无菌培养皿中备用5初代培养5.1初代培养基WPM+IBA 0.05mg/L+ZT 0.5mg/LpH 5.05.2接种在超净工作台上用已灭菌的剪刀镊子将消过毒的外植体均匀分成1.5 cm2.0 cm的小段每段含1芽2芽接种于初代培养基中每瓶5株10株注明品种编号和接种日期5.3培养条件1DB32/T3306—2017温度25℃±2℃光照强度2000lx3000lx光照时间16h/d培养100 d120 d6病毒检测抽取初代培养的蓝莓无菌苗进行蓝莓枯焦病毒( BLScV)蓝莓急性坏死病毒(BLShV )蓝莓鞋带病毒(BSSV)蓝莓红环斑病毒(BRRV)蓝莓坏死环斑病烟草环斑病毒(TRSV)蓝莓叶片斑点病毒(BLMV)的病毒检测检测方法采用PCR/RT-PCR无病毒苗作为核心种苗继代扩繁培养7继代培养7.1继代培养基WPM+NAA 0.5mg/L+ZT 1mg/LpH 5.07.2培养条件温度为25℃±2℃光照强度1000lx3000lx光照时间12h/d16h/d60 d90 d培养一代培养不超过15代8壮苗培养8.1壮苗培养基WPM+IBA 0.1mg/LpH 5.05.58.2培养条件温度为25℃±2℃光照强度2000lx3000lx光照时间14h/d16h/d培养90 d120 d9驯化生根9.1生根设施在苗床上搭建高度50 cm的小拱棚安装喷灌设备苗床上面铺一层无纺布拱棚上面覆盖塑料薄膜上盖遮阳网9.2基质选用苔藓作为专用基质浸泡12 h甩干湿度控制在40%60%塞进5×10的穴盘内9.3炼苗将培养瓶放入温室内上盖一层遮阳网封口炼苗7d,然后打开遮阳网把瓶盖拧松再炼苗7 d9.4扦插选择生长健壮长度5cm以上木质化程度好的组培苗进行扦插先用清水清洗掉培养基剪去根部膨大部分去掉下部三分之一的叶片在萘乙酸 (NAA)1000mg/L的生根液中浸蘸1min然后用镊子捏住插穗基部插入塞好苔藓的穴盘内压紧每穴1株插入的深度为2 cm3 cm2DB32/T3306—20179.5插后管理插后立即喷水1次15d内每天叶面喷水2次3次相对湿度控制在80%100%15 d后开始生根并长出新叶每天喷水1次湿度控制在70%左右30d后去掉拱棚上的遮阳网和塑料薄膜湿度控制在60%左右温度控制在20℃30℃10上钵10.1栽培容器选用13×12黑色软质营养钵为宜10.2栽培基质壤土草碳土腐锯末按3:1:1的体积比例混合加入硫