ICS 67.050B 20DB12备案号：天 津 市 地 方 标 准DB12/T 650—2016转基因植物及其产品成分筛查Cry1Ab/Cry1Ac试纸条法Screening method for genetically modified plantCry1Ab/Cry1Ac test strip2016-09-27发布2016-11-01实施天津市市场和质量监督管理委员会发布DB12/T 650—2016前言本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本标准由天津市农村工作委员会提出。本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所、中国农业科学院生物技术研究所、天津市东丽区产品质量监督检验所。本标准主要起草人：兰青阔、李亮、黄凤军、刘雪岩、赵新、宛煜嵩、易萌、陈锐、徐石勇。本标准2016年9月首次发布。2DB12/T 650—2016转基因植物及其产品成分筛查Cry1Ab/Cry1Ac 试纸条法1范围本标准规定了转基因植物及其产品成分Cry1Ab/Cry1Ac试纸条法的术语和定义、检测方法、结果判本标准适用于表达 Cry1Ab/Cry1Ac蛋白的转基因大豆MON87701，转基因玉米 MON810、Bt11、断。Bt176，转基因水稻TT51-1、克螟稻、科丰六号，转基因棉花 MON531、MON15985等主要植物及其初级加工产品中Cry1Ab/Cry1Ac蛋白的试纸条筛查。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3原理转基因快速检测试纸应用双抗体夹心免疫层析的原理，样本中的抗原在侧向移动的过程中与标记的特异性单克隆抗体1结合，形成抗原-抗体复合物，继续向前方流动和NC膜检测线上特异性单克隆抗体2结合形成双抗体夹心复合物，并显色。如果样本中转基因作物含量大于5%，控制线（Control Line，简称C）和检测线（TestLine，简称T）显色，结果为阳性；反之，控制线（C）显色，检测线（T）不显色，结果为阴性。4仪器设备及试剂4.1仪器设备匀浆器；天平；移液枪；振荡器；离心管等。4.2试剂提取缓冲液；实验用水为重蒸馏水或符合GB/T 6682规定的一级水等。5方法步骤5.1样品的采集和预处理使用离心管盖夹取或者打孔的方式，采集植物新鲜组织样品生长点附近约3 cm幼嫩组织100 mg-200mg，置于2 mL离心管中。作物籽粒可使用铁钳夹碎，取较碎部分置于2 mL离心管中。5.2样品研磨加1mL纯水或提取缓冲液于离心管中，使用一次性研磨杵手工研磨或电钻研磨，确保上层液体体积应至少占总体积三分之一。3DB12/T 650—2016对于混合样品，应称重后使用大容量研磨仪器研磨至100目大小粉末，然后加入水或提取缓冲液。5.35.4涡旋震荡在振荡器上用力震荡30 s-1 min，确保样品充分混匀。试纸条检测震荡后，静置1min待固体物质沉淀分层，尽快从包装中取出试纸条，按照箭头方向插入离心管，开始计时。5.5读取结果5-10 min底色褪去后，将试纸条水平放置于观察者正面读取结果。5.6结果判断测试结果分为阴性、阳性和无效三种。阴性（—）：控制线C显色，检测线Ｔ不显色；阳性（＋）：控制线C显色，检测线Ｔ显色肉眼可见；无效：C线未出现，可能操作不当或试纸失效。表明操作过程不正确或试纸条已变质损坏。在此情况下，应重新测试。_________________________________4