附件2 饮料中γ-丁内酯及其相关物质的测定BJS 201803 1范围本方法规定了饮料中 γ-丁内酯、1,4-丁二醇及 γ-羟基丁酸液相色谱-串联质谱的测定方法。本方法适用于功能饮料、含乳饮料、果汁饮料、碳酸饮料、茶饮料、咖啡类饮料、含酒精饮料、苹果醋等各类饮料食品中γ-丁内酯、1,4-丁二醇及γ-羟基丁酸的测定。2原理不同类型的样品经过沉淀蛋白、过滤或除气等处理后过滤，滤液供液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。3试剂和材料注:水为 GB/T 6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1甲醇：色谱纯。3.1.2甲酸：色谱纯。3.1.3乙腈：色谱纯。3.2试剂配制0.02%甲酸水溶液：取甲酸 0.2mL用水稀释至1000mL。3.3标准品γ-丁内酯、1,4-丁二醇及 γ-羟基丁酸对照品或标准物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量详见附录 A中的表A.1，纯度均≥98%。3.4标准溶液配制3.4.1标准储备液(1mg/mL)：分别精密称取 γ-丁内酯、1,4-丁二醇及 γ-羟基丁酸（3.3）各 10.0 mg于 10 mL容量瓶中，用甲醇(3.1.1)溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1mg/mL标准储备液，—1——﹣20℃保存，保存期 1个月。3.4.2混合标准中间工作液（ 10μg/mL）：分别准确吸取γ-丁内酯、1,4-丁二醇及γ-羟基丁酸(1mg/mL)(3.4.1)各 1mL至100ml容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，制成10 μg/mL的混合标准中间工作液。临用新制。3.4.3混合基质标准工作溶液：分别准确吸取混合标准中间工作液 (10 μg/mL)(3.4.2)适量，用空白试样溶液稀释，得到 γ-丁内酯、1,4-丁二醇及 γ-羟基丁酸浓度分别为 50ng/mL、100ng/mL、200 ng/mL、500 ng/ mL、1000 ng/ mL的基质混合标准系列工作溶液。临用新制。4仪器和设备4.1高效液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾（ESI）离子源。4.2分析天平：感量分别为 0.01 mg和0.1 mg。4.3涡旋振荡器。4.4离心机：转速≥6000r/min。5分析步骤5.1试样制备5.1.1含乳饮料、咖啡类等含蛋白饮料精密称取混匀后的样品 1g（精确至 0.001g）至 10 mL刻度试管中，加入乙腈（3.1.3）定容至 5 mL混匀，涡旋1min，转移至 15 mL离心管中，6000rpm离心3min，精密吸取上清液1mL至 10mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，过微孔滤膜（0.22μm），取续滤液，备用。5.1.2果汁饮料取混匀后样品 50mL，用滤纸滤过，再精密称取滤液 1 g（精确至 0.001g）至 10mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，过微孔滤膜（0.22μm），取续滤液，备用。5.1.3碳酸饮料、含酒精饮料取混匀后样品 50 mL至烧杯中，超声20min，去除饮料中的气体，再精密称取 1 g（精确至0.001g）至 10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，过微孔滤膜（0.22μm），取续滤液，备用。——2—5.1.4其它饮料基质精密称取混匀后的样品 1g（精确至 0.001g）至 10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，过微孔滤膜（0.22μm），取续滤液，备用。5.1.5空白试验称取 1g空白试样，按试样同法处理，制得空白试样溶液，备用。5.2仪器参考条件5.2.1色谱条件a)色谱柱：C18 (3.0×150 mm, 1.8 μm)，或性能相当者。b）流动相：A为0.02%的甲酸水溶液（3.2），B为甲醇（3.1.1），梯度洗脱程序见表1。c）流速：400 μL/min。d)柱温：40℃。e)进样量：2 μL。表 1梯度洗脱程序表梯度时间/min流动相A/%流动相B/%095955554.57.59.59.612959555959555.2.2质谱条件a)离子源：电喷雾离子源（ESI源），正离子模式。b)检测方式：多反应离子监测（MRM）。c)碰撞气为高纯氮气，干燥气、雾化气、鞘气等均为氮气或其他合适气体，使用前应调节相应参数使质谱灵敏度达到检测要求，毛细管电压、干燥气温度、鞘气温度、鞘气流量、喷嘴电压、碰—3——撞能量、碎裂电压等参数应优化至最佳灵敏度，监测离子对和定量