文本描述
中 华 人 民 共 和 国 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准犛犖／犜２５１５ —２０１０牛 结 节 疹 检 疫 技 术 规 范犘狉狅狋狅犮狅犾狅犳 狇狌犪狉犪狀狋犻狀犲犳狅狉犾狌犿狆狔狊犽犻狀 犱犻狊犲犪狊犲２０１００３０２ 发 布２０１００９１６ 实 施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 中 华 人 民 共 和 国 出 入境 检 验 检 疫行 业 标 准牛 结 节 疹 检 疫 技 术 规 范ＳＮ／Ｔ２５１５ —２０１０中国 标准出 版社 出版北 京 复 兴 门 外 三 里 河北 街 １６号邮 政 编 码 ：１０００４５网 址 ｗｗｗ．ｓｐｃ电 话 ：６８５２３９４６ ６８５１７５４８中 国 标 准 出 版 社 秦 皇岛 印 刷 厂 印 刷开 本８８０ × １２３０ １／１６ 印 张０．７５ 字 数千 字１５２０１０ 年 ５ 月第 一 版 ２０１０ 年 ５ 月 第 一 次 印 刷印 数 １—１６００书 号 ：１５５０６６·２２０８２８ 定 价１６ ．００元 犛犖／犜２５１５ —２０１０前 言本 标 准 的 附 录 Ａ为 规 范 性 附 录 、附 录 Ｂ 为 资 料 性 附 录。本 标 准 由 国 家 认 证 认 可 监 督 管 理 委 员 会 提 出并 归 口。本 标 准 起 草 单 位 ：中 华 人 民 共 和 国 广 东 出入 境 检 验 检 疫 局。本 标 准 主 要 起 草 人 ：邱 杨 、鱼 海 琼 、林志 雄 、唐 丽 霞 、赵 丽 、李 艳 霞 、黄 名 秋。本 标 准 系 首 次 发 布 的 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标准。Ⅰ 犛犖／犜２５１５ —２０１０牛 结 节 疹 检 疫 技 术 规 范１ 范 围本 标 准 规 定 了 牛 结 节 疹 电 镜 观 察 、病 毒 分离 、血 清 中 和 试 验 等 诊 断 方 法。本 标 准 适 用 于 牛 结 节 疹 的 检 疫。２ 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 中 的 条 款 通 过 本 标 准 的 引 用 而 成 为本 标 准 的 条 款 。 凡 是 注 日 期 的 引 用文 件 ，其 随 后 所 有的 修 改 单 （不 包 括 勘 误 的 内 容 ）或 修 订版 均 不 适 用 于 本 标 准 ，然 而 ，鼓 励 根 据 本 标 准 达 成 协 议 的 各 方 研 究是 否 可 使 用 这 些 文 件 的 最 新 版 本 。 凡 是 不 注 日 期的 引 用 文 件 ，其 最 新 版 本 适 用 于 本 标 准。ＧＢ／Ｔ６６８２ 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法３ 缩 略 语下 列 缩 略 词 适 用 于 本 标 准。３．１ＬＳＤ ：牛 结 节 疹。３．２ＥＤＴＡ：乙 二 胺 四 乙 酸。３．３Ｇ Ｍ Ｅ Ｍ ：Ｇｌａｓｇｏｗ 改 良Ｅａｇｌｅ’ｓ 培 养基。３．４３．５３．６３．７３．８３．９３．１０３．１１ＣＰＥ ：致 细 胞 病 变作 用。Ｈ ＆ Ｅ ：苏 木 精伊 红 染 色。ＬＴ ：羔 羊 睾 丸。ＰＢＳ：磷酸 盐 缓 冲 液。ＮＢ ：营 养 肉 汤。ＢＨ Ｋ２１ ：幼 仓 鼠 肾 细 胞。ＢＥＫ：牛 肾 细 胞。Ｖｅｒｏ：非洲 绿 猴 肾 细 胞。４ 试 剂 和 材 料４．１ 三 蒸 水 应 符 合ＧＢ／Ｔ ６６８２要 求。４．２ 肝 素 或 ＥＤＴＡ。１ 犛犖／犜２５１５ —２０１０４．３ １０％ 福 尔 马 林 。４．４ 含 抗 生 素 的 ＰＢＳ缓 冲 液 （ｐＨ７．２）：配 制 方 法 见 附 录Ａ。４．５ Ｇ Ｍ Ｅ Ｍ。４．６ 无 水 丙 酮。４．７ 石 蜡 膜 或 蜡 板。４．８ ｐＨ７．８ＴｒｉｓＥＤＴＡ 缓 冲 液 ：配 制 方 法 见 附 录Ａ。４．９ ｐＨ７．８，１％ 磷 钨 酸 ：配制 方 法 见 附 录 Ａ。４．１０ 牛 结 节 疹 病 毒Ｎｅｅｔｈｌｉｎｇ 毒 株。４．１１ 原 代 或 次 代ＬＴ 细 胞。４．１２ 采 用Ｍ Ｅ Ｍ 培 养 液 ，加 １０ ％ 犊 牛 血 清 ，２％ 水 解 乳 蛋白 ，１００ μｇ／ｍＬ青 霉 素 ，１００ μｇ／ｍＬ链 霉 素，１００ μｇ／ｍＬ４．１３ 待 检 血 清 ：无 菌 静脉 采 血 ，分 离 血 清 ，并 于 ５６ ℃ 灭 活 ３０ｍｉｎ 。４．１４ 阳 性 血 清 ：同 毒 株来 源。制 霉 菌 素。４．１５ 阴 性 血 清 ：阴 性 牛场 健 康 牛 血 清。５ 器 材 和 设 备５．１ 解 剖 镜。５．２ 水 浴 锅。５．３ 恒 温 箱。５．４ 普 通 冰 箱 和 超 低 温 冰 箱。５．５ 台 式 离 心 机。５．６ 细 胞 培 养 板。５．７ 细 胞 培 养 箱。５．８ 二 氧 化 碳 培 养 箱。５．９ ２０ μＬ ～２００ μＬ微 量 移 液 器。５．１０ 倒 置 显 微 镜。５．１１ 电 子 显 微 镜。６ 电 镜 观 察６．１ 取 新 鲜 的 皮 肤 结 节 ，制 备 组织 悬 液 ，用 透 射 电 镜 观 察 。 方 法 是 ：取 一 滴悬 液 于 石 蜡 膜 或 蜡 板 上 ，将４００ 目 六 角 形 电 子 显 微 镜 网格 浮 在 其 上 ，该 网 格具 有 绒 毛 状 碳 基 质 并在 戊 胺 蒸 气 经 光 激活 用 。１ ｍｉｎ后 ，将 网 栅 转 移 到 一 滴 ｐＨ７．８ＴｒｉｓＥＤＴＡ 缓 冲 液 中 ２０ ｓ，然
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