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SNT_2497_20-2010进出口危险化学品安全试验方法第20部分:Bradford法测定蛋白质含量PDF

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文本描述
中 华 人 民 共 和 国 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准犛犖/犜2497 .20 —2010进 出 口 危 险 化 学 品 安 全 试 验 方 法第 20 部 分 :犅狉犪犱犳狅狉犱 法 测 定 蛋 白 质 含 量犜犲狊狋 犿犲狋犺狅犱 狅犳犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋 犱犪狀犵犲狉狅狌狊 犮犺犲犿犻犮犪犾狊—犘犪狉狋20 :犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狆狉狅狋犲犻狀 犮狅狀狋犲狀狋狌狊犻狀犵 犅狉犪犱犳狅狉犱 犿犲狋犺狅犱20100302 发 布20100916 实 施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 犛犖/犜2497 .20 —2010前    言    SN/T2497 《进 出 口 危 险 化 学 品 安 全 试 验 方 法 》系 列 标 准 共 分 为 29 部 分 :——— 第 1 部 分 :体 内 哺 乳 动 物 肝 细 胞程 序 外——— 第 2 部 分 :空 斑 形 成 细 胞 (PFC)试 验;——— 第 3 部 分 :大 型 溞 繁 殖 试 验;合 成 (UDS)试 验;DN A——— 第 4 部 分 :酿 酒 酵 母 有 丝 分 裂 重组 试 验;——— 第 5 部 分 :睾 丸 细 胞UDS试 验;——— 第 6 部 分 :哺 乳 类 动 物 细 胞 姐 妹染 色 单 体 互 换 体 外 试 验;——— 第 7 部 分 :小 鼠 耳 肿 胀 试 验;——— 第 8 部 分 :腘 窝 淋 巴 结 试 验;——— 第 9 部 分 :血 清 溶 血 素 测 定 试 验 ;——— 第 10 部 分 :T 淋 巴细 胞 增 殖 功 能 测 定 试 验;——— 第 11 部 分 :种 系 突 变 试 验 ;——— 第 12 部 分 :单 细 胞 凝 胶 电泳 分 析 试 验;——— 第 13 部 分 :荧 光 原 位 杂 交试 验;——— 第 14 部 分 :SDS聚丙 烯 酰胺 凝 胶 电 泳 试 验;——— 第 15 部 分 :PCRSSCP 实 验;——— 第 16 部 分 :WesternBlot实 验;——— 第 17 部 分 :哺 乳 动 物 行 为毒 理 学 试 验;——— 第 18 部 分 :DN A加 合 物 的 检 测 方 法;——— 第 19 部 分 :NorthernBlot 实 验;——— 第 20 部 分 :Bradford法 测 定 蛋 白 质 含 量;——— 第 21 部 分 :琼 脂 糖 凝 胶 电泳 试 验;——— 第 22 部 分 :DN A的值 测 定 方 法;Tm——— 第 23 部 分 :细 胞 器 的 分 离实 验 方 法;——— 第 24 部 分 :细 胞 免 疫 功 能体 外 检 测 方 法;——— 第 25 部 分 :体 液 免 疫 功 能试 验;——— 第 26 部 分 :巨 噬 细 胞 功 能试 验;——— 第 27 部 分 :流 式 细 胞 术 检测 凋 亡;——— 第 28 部 分 :穿 梭 质 粒 在 突变 检 验 中 的 应 用;——— 第 29 部 分 :生 化 需 氧 量 (BOD)测 定。本 部 分 为 SN/T2497 系 列标 准 的 第 20 部 分。本 部 分 由 国 家 认 证 认 可 监 督 管 理 委 员 会 提 出并 归 口。本 部 分 负 责 起 草 单 位 :中 华 人 民 共 和 国 天津 出 入 境 检 验 检 疫 局 、中 华 人 民 共 和 国 湖 南 出 入 境 检 验 检疫 局。本 部 分 主 要 起 草 人 :于 艳 军 、王 利 兵 、李晶 、韩 伟 、向 雪 洁 、李 学 洋。本 部 分 系 首 次 发 布 的 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标准。Ⅰ 犛犖/犜2497 .20 —2010进 出 口 危 险 化 学 品 安 全 试 验 方 法第 20 部 分 :犅狉犪犱犳狅狉犱 法 测 定 蛋 白 质 含 量1 范 围SN/T2497 的 本 部 分 规 定 了 进 出口 危 险 化 学 品 安 全 试 验 中验 样 品 、溶 液 和 试 验 步 骤。本 部 分 适 用 于 进 出 口 危 险 化 学 品 安 全 试 验Bradford 法 测 定 蛋 白 质 含 量。Bradford 法 测 定 蛋白 质 含 量 试 验 的 试2 原 理考 马 斯 亮 兰 G250染 料 ,在 酸 性 溶 液 中 与 蛋 白 质 结合 ,使 染 料 的 最 大 吸 收 峰的 位 置 ,由 465 nm 变为 595 nm ,溶 液 的 颜 色 也由 棕 黑 色 变 为 蓝 色 。 在595 nm下 测 定 的 吸 光 度 值A595 ,与 蛋 白质 浓 度 成正 比。3 试 剂3.1  水本 部 分 所 述 试 验 方 法 中 涉 及 到 的 水 均 为 灭 菌蒸 馏 水。3.2 考 马 斯 亮 蓝 溶 液称 100 mg考 马 斯 亮 兰 G250 ,溶 于 50 mL 95 % 的 乙 醇 后 ,再 加 入 120mL 85 % 的 磷 酸 ,用 水 稀 释 至1 L ,滤 纸 过 滤 ,4 ℃ 保 存。3.3 牛 血 清 白 蛋 白 (犅犛犃 )溶 液用 g球 蛋 白或 牛 血 清 白 蛋 白 (BSA )配 制 成 1.0mg/mL 的 标 准 蛋 白 质 溶 液。4 试 验 步 骤4.1 标 准 曲 线用 1.0mg/mL 的 标 准 蛋 白质 溶 液 给 各试 管 分 别 加入 :0 mL 、0.01mL 、0.02mL 、0.04mL、0.06mL 、0.08 mL、0.1 mL ,然 后 用 无离 子 水 补 充 到 0.1mL ,各 浓 度 2 个 平 行样 。 最 后 各 试 管 中 分 别加