文本描述
中 华 人 民 共 和 国 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准犛犖／犜２４５２ —２０１０绵 羊 痘 和 山 羊 痘 检 疫 技 术 规 范犘狉狅狋狅犮狅犾狅犳狋犺犲 狇狌犪狉犪狀狋犻狀犲犳狅狉狊犺犲犲狆狆狅狓 犪狀犱 犵狅犪狋狆狅狓２０１００１１０ 发 布２０１００７１６ 实 施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 犛犖／犜２４５２ —２０１０前 言本 标 准 参 照 ＯＩＥ 《陆 生 动物 诊 断 试 验 和 疫 苗 标 准 手 册 》（２００８ 年 ）中 第 ２．７．１４ 章 制 定。本 标 准 的 附 录 Ａ 、附 录 Ｂ 、附 录 Ｃ和 附 录 Ｄ 均 为 规 范 性 附 录。本 标 准 由 国 家 认 证 认 可 监 督 管 理 委 员 会 提 出并 归 口。本 标 准 起 草 单 位 ：中 华 人 民 共 和 国 内 蒙 古出 入 境 检 验 检 疫 局 、中 华 人 民 共 和 国 北 京 出 入 境 检 验 检 疫局 、中 国 检 验 检 疫 科 学 研 究 院 、中 华 人民 共 和 国 新 疆 出 入 境 检 验 检 疫 局。本 标 准 主 要 起 草 人 ：王 海 艳 、刘 中 学 、赵林 立 、刘 虹 、敖 威 华 、高 志 强 、季 新 成 、薛 强 、乔 彩霞 、任 立 新。本 标 准 系 首 次 发 布 的 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标准。Ⅰ 犛犖／犜２４５２ —２０１０绵 羊 痘 和 山 羊 痘 检 疫 技 术 规 范１ 范 围本 标 准 规 定 了 绵 羊 痘 和 山 羊 痘 流 行 病 学 调 查、临 床 症 状 与 病 理 学 观 察 、实 验 室 检 测 等 技 术 内 容。本 标 准 适 用 于 绵 羊 痘 和 山 羊 痘 的 诊 断 、检疫。２ 设 备 和 材 料２．１ 恒 温 培 养 箱 、恒 温 水 浴 箱 、冰箱。２．２ 生 物 显 微 镜 、透 射 电 子 显 微镜。２．３ 高 压 灭 菌 器 、高 速 冷 冻 离 心机。２．４ 单 道 微 量 加 样 器：μＬ ～１０ μＬ ，１００ μＬ ，２００μＬ ，１ ０００ μＬ。１２．５ 细 胞 培 养 瓶 ：２５ ｃｍ２。２．６ 酶 标 仪 、蛋 白 凝 胶 电 泳 仪 、电转 印 仪。３ 培 养 基 和 试 剂３．１ Ｈａｎｋ’ｓ液 ：见 附 录３．２ ０．２５％胰 酶 消 化 液 ：见 附 录３．３ Ｍ Ｅ Ｍ 细 胞 培 养 液 ：具 体 配 制 方 法 按 厂 家 规 定 的 程序 进 行 ，用 ０．２ μｍ瓶 中 ，４ ℃ 保 存 备 用。３．４ ＥＤＴＡ胰 蛋 白 酶 分 散 液 ：见 附 录Ａ第Ａ ．１ 章。Ａ第Ａ ．２ 章。的 滤 膜 过 滤 除 菌 ，分装 于 小第Ａ ．３ 章。Ａ３．５ 抗 生 素 溶 液 ：见 附 录Ａ第Ａ ．４ 章。３．６ 绵 羊 痘 和 山 羊 痘 抗 原 及 相 应 的标 准 阴 性 血 清 和 标 准 阳 性 血 清。３．７ 青 霉 素 、链 霉 素 、制 霉 菌素 （或 两 性 霉 素 ）、新 霉 素。３．８ ＰＢＳ 溶 液：见 附 录第Ａ ．５ 章。Ａ３．９ １０× Ｔｒｉｓ甘氨 酸 电 泳 缓 冲 溶 液 （ｐＨ８．３）：见 附 录第Ａ ．６ 章。Ａ３．１０ 转 移 缓 冲 溶 液 ：见附 录第Ａ ．７ 章。Ａ３．１１ 硝 酸 纤 维 素 膜 、胎牛 血 清 、蛋 白 质 分 子 量 Ｍａｒｋｅｒ、牛血 清 白蛋 白 、辣 根 过 氧 化 物 酶 标 记 的 兔 （或 小鼠 ）抗 羊 ＩｇＧ。３．１２ １２ ％ 分离 胶 ：见 附 录 第 Ａ ．８ 章。３．１３ ５％的 积 层 胶：见 附 录第Ａ ．９ 章。Ａ３．１４ １×ＳＤＳ凝 胶 上 样 缓 冲 液 ：见 附 录第Ａ ．１０ 章。Ａ３．１５ 考 马 斯 亮 蓝 染 色 液 ：见附 录３．１６ １％磷 钨 酸 溶液 （ｐＨ７．２）：见 附 录第Ａ ．１１ 章。ＡＡ第Ａ ．１２ 章。３．１７ 琼 脂 板 ：见 附 录３．１８ 底 物 溶 液 ：见 附 录第Ａ ．１３ 章。Ａ第Ａ ．１４ 章。Ａ３．１９ 苏 木 素 染 色 液 ：见附 录第Ａ ．１５ 章。Ａ３．２０ ０．５％ 伊 红 染 色 液 ：见 附 录３．２１ 无 水 乙 醇 、二 甲 苯 。第Ａ ．１６ 章。Ａ３．２２ 石 蜡 ：熔 点 分 别 为５２ ℃ ～５４℃ ，５４ ℃ ～５６℃ ，５６ ℃ ～５８℃。３．２３ 绵 羊 羔 睾 丸 细 胞 的 制备 ：见 附 录 Ｂ。１ 犛犖／犜２４５２ —２０１０４ 临 床 症 状见 附 录 Ｃ。５ 检 测 方 法５．１ 病 毒 电 镜 观 察５．１．１ 将 活 体 或 死 后 的 皮 肤 丘 疹 、肺 部 的 病 灶 或 淋 巴 结 用灭 菌 剪 刀 和 镊 子 切 碎 后 ，放 入灭 菌 的 研 钵 内加 入 灭 菌 砂 后 进 行 研 磨 。 研 碎 后 加 入 等体 积 含 抗 生 素 （青 霉 素 ［１ ０００单 位／ｍＬ］，链 霉 素 ［１ｍｇ／ｍＬ ］，制 霉 菌 素 ［１００ 单 位／ｍＬ］或两 性 霉 素 ［２．５ μｇ／ｍＬ］，新 霉 素 ［２００ 单 位／ｍＬ ］）的 ＰＢＳ 溶液 制 成 样 品 悬 液。将 样 品 悬 液 反 复 冻 融 三 次 后 ，于 ６００犵离 心 １０ ｍｉｎ ，取 上 清 液 保 存 备 用。５．１．２ 取 一 滴 上 清 液 置 于 载 玻 片 上 ，将 ４００ 目 碳 网膜 漂 浮 于 液 滴 上 １ ｍｉ
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