文本描述
中 华 人 民 共 和 国 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准犛犖／犜２４１５ —２０１０进 出 口 乳 及 乳 制 品 中 沙 门 氏 菌快 速 检 测 方 法实 时 荧 光 犘犆犚法 犚犪狆犻犱 犱犲狋犲犮狋犻狅狀 狅犳犛犪犾犿狅狀犲犾犾犪 犻狀 犿犻犾犽 犪狀犱 犿犻犾犽 狆狉狅犱狌犮狋狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋— 犚犲犪犾狋犻犿犲 犘犆犚犿犲狋犺狅犱２０１００１１０ 发 布２０１００７１６ 实 施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 犛犖／犜２４１５ —２０１０前 言 本 标 准 的 附 录 Ａ为 规 范 性 附 录。本 标 准 由 国 家 认 证 认 可 监 督 管 理 委 员 会 提 出并 归 口。本 标 准 起 草 单 位 ：中 国 检 验 检 疫 科 学 研 究院 、中 华 人 民 共 和 国 江 苏 出 入 境 检验 检 疫 局 、中 华 人 民 共和 国 福 建 出 入 境 检 验 检 疫 局 、中 华 人 民 共和 国 安 徽 出 入 境 检 验 检 疫 局。本 标 准 主 要 起 草 人 ：袁 飞 、郑 海 松 、邵 碧 英 、杨 海 荣 、祝 长 青 、赵 贵 明 、张 菲 菲 、赵勇 胜 、吴 亚 君 、黄 文 胜、陈 颖 、徐 宝 梁。本 标 准 系 首 次 发 布 的 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标准。Ⅰ 犛犖／犜２４１５ —２０１０进 出 口 乳 及 乳 制 品 中 沙 门 氏 菌快 速 检 测 方 法 实 时 荧 光犘犆犚法１ 范 围本 标 准 规 定 了 进 出 口 乳 及 乳 制 品 中 沙 门 氏 菌的 实 时 荧 光 ＰＣＲ检 测 方 法。本 标 准 适 用 于 进 出 口 乳 及 乳 制 品 中 沙 门 氏 菌的 快 速 检 测。２ 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 中 的 条 款 通 过 本 标 准 的 引 用 而 成 为本 标 准 的 条 款 。 凡 是 注 日 期 的 引 用文 件 ，其 随 后 所 有的 修 改 单 （不 包 括 勘 误 的 内 容 ）或 修 订版 均 不 适 用 于 本 标 准 ，然 而 ，鼓 励 根 据 本 标 准 达 成 协 议 的 各 方 研 究是 否 可 使 用 这 些 文 件 的 最 新 版 本 。 凡 是 不 注 日 期的 引 用 文 件 ，其 最 新 版 本 适 用 于 本 标 准。ＧＢ／Ｔ４７８９ ．４ 食 品 卫 生 微 生 物 学检 验 沙 门 氏 菌 检 验ＧＢ／Ｔ６６８２ 分 析 试 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法ＳＮ／Ｔ１１９３ 基 因 检 验 实 验 室 技 术 要 求３ 缩 略 语下 列 缩 略 语 适 用 于 本 标 准。３．１犘犆犚 狆狅犾狔犿犲狉犪狊犲犮犺犪犻狀狉犲犪犮狋犻狅狀聚 合 酶 链 式 反 应。３．２实 时 荧 光 犘犆犚实 时 荧 光 聚 合 酶 链 式 反 应。３．３犇犖犃 犱犲狅狓狔狉犻犫狅狀狌犾犲犻犮 犪犮犻犱脱 氧 核 糖 核 酸。３．４犱犖犜犘 犱犲狅狓狔狉犻犫狅狀狌犮犾犲狅狊犻犱犲狋狉犻狆犺狅狊狆犺犪狋犲脱 氧 核 苷 酸 三 磷 酸。３．５犱犃犜犘 犱犲狅狓狔犪犱犲狀狅狊犻狀犲 狋狉犻狆犺狅狊狆犺犪狋犲脱 氧 腺 苷 三 磷 酸。３．６犱犆犜犘 犱犲狅狓狔犮狔狋犻犱犻狀犲狋狉犻狆犺狅狊狆犺犪狋犲脱 氧 胞 苷 三 磷 酸。３．７犱犌犜犘 犱犲狅狓狔犵狌犪狀狅狊犻狀犲 狋狉犻狆犺狅狊狆犺犪狋犲脱 氧 鸟 苷 三 磷 酸。１ 犛犖／犜２４１５ —２０１０３．８犱犜犜犘 犱犲狅狓狔狋犺狔犿犻犱犻狀犲狋狉犻狆犺狅狊狆犺犪狋犲脱 氧 胸 苷 三 磷 酸。３．９犆犜犃犅 犮犲狋狔犾狋狉犻狋犺狔犾犪犿 犿狅狀犻狌犿犫狉狅犿犻犱犲十 六 烷 基 三 甲 基 溴 化 铵。３．１０３．１１３．１２犜狉犻狊 狋狉犻狊（犺狔犱狉狅狓狔 犿犲狋犺狔犾）犪犿犻狀狅犿犲狋犺犪狀犲三 （羟 甲 基 ）氨 基 甲 烷。犈犇犜犃 犲狋犺狔犾犲狀犲 犱犻犪犿犻狀犲狋犲狋狉犪犪犮犲狋犻犮 犪犮犻犱乙 二 胺 四 乙 酸。犆狋值每 个 反 应 管 内 的 荧 光 信 号 达 到 设 定 的 阈 值 时所 经 历 的 循 环 数。４ 实 验 条 件 的 一 般 要 求实 验 过 程 中 的 措 施 按 照 ＳＮ／Ｔ１１９３中 的 规 定 执 行 ，以 防 止 交 叉 污 染。５ 测 定 方 法５．１ 方 法 提 要乳 及 乳 制 品 经 增 菌 后 ，取 增 菌 液 １ ｍＬ加 到 １．５ｍＬ 无 菌 离 心管 中 ，８ ０００犵 离 心 ５ ｍｉｎ ，尽 量 吸 弃 上清 液 ；提 取 ＤＮ Ａ ，取 ＤＮＡ 模 板 进 行 荧 光 ＰＣＲ扩 增 ，观 察 荧 光 ＰＣＲ仪 的 实时 曲 线 ，对 乳 及 乳 制 品 中 的 沙门 氏 菌 进 行 快 速 检 验。５．２ 试 剂 和 材 料除 另 有 规 定 外 ，试 剂 为 分 析 纯 或 生 化 试 剂。 实 验 用 水 应 符 合 ＧＢ／Ｔ６６８２ 中 一 级 水 的 规 格 。所 有 试剂 均 用 无 ＤＮ Ａ酶 污 染 的 容 器 分 装。５．２．１ 检 测 用 引 物 （对 ）序 列５’ＧＣＧＴＴＣＴＧＡ ＡＣＣＴＴＴＧＧＴＡＡＴＡ Ａ３ ’’５ Ｃ ＧＴＴＣＧＧＧＣＡＡＴＴＣＡＴＴＡ３’引 物 （对 ）１０ μｍｏｌ／Ｌ 。５．２．２ 探 针５’ＦＡＭＴＧＧＣＧＧＴＧＧＧＴＴＴＴＧＴＴＧＴＣＴＴＣＴＴＡＭ ＲＡ３ ’１０ μｍｏｌ／Ｌ 。５．２．３ 犜犪狇ＤＮ Ａ 聚 合 酶。５．２．４ ｄＮＴＰ：１００ｍ ｍｏｌ／Ｌ。５．２．５ 核 酸 裂 解 液 ：２％ ＣＴＡＢ，１００
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