版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售中 华 人 民 共 和 国 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准! "!"#!"#$ !""%地 中 海 实 蝇 检 疫 鉴 定 方 法$%&法! "'()*+,-,./+,0*0-1)(,+)22/*)/*-23,+-45!"#$%&%&'($)&%$%$6,)()7/**#"$%&820+0.04!""%9&!9!'发 布!""(9"%9"&实 施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售!"!#!"#$"!""%前 !!言!!本 标 准 由 国 家 认 证 认可 监 督 管 理 委 员 会 提 出 并 归 口!本 标 准 起 草 单 位 "中 华 人民 共 和 国 深 圳 出入 境 检 验 检 疫 局 #中华 人 民 共 和 国广 东 出 入 境 检 验检疫 局!本 标 准 主 要 起 草 人 "杨 伟 东 #余 道 坚 #胡 学 难 #康 林#陈 枝 楠 #仲 建 忠 #章 桂 明 #徐 浪!本 标 准 系 首 次 发 布 的 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标准!! 版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售!"!#!"#$"!""%地 中 海 实 蝇 检 疫 鉴 定 方 法$%&法&!范 围本 标 准 规 定 了 地 中 海 实 蝇 常 规!"#和 $%&#'())*实时 荧 光 !"#鉴 定 方 法!本 标 准 适 用 于 进 境 水 果 #茄 科 蔬 菜 $包 括 番 茄 #茄 子和 辣 椒 等 %及 包 装 物 #土 壤 等 的 检 验检 疫 中 对 地中 海 实 蝇 卵 #幼 虫 #蛹 和 成 虫 的 种 类 鉴 定!!!规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 中 的 条 款 通 过 本 标 准 的 引 用 而 成 为本 标 准 的 条 款 !凡 是 注 明 日 期的 引 用 文 件 &其 随 后 所有 的 修 改 单 $不 包 括 勘 误 的 内 容 %或 修 订 版 均 不 适 用于 本 标 准 &然 而 &鼓 励 根 据 标 准 达 成 协 议 的 各 方 研 究是 否 可 使 用 这 些 文 件 的 最 新 版 本 !凡是 不 注 明 日 期 的 引 用 文 件 &其 最 新 版 本 适 用 于 本 标 准!%'&'+,,-.!分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法$*)/0$12,3,#!缩 略 语下 列 缩 略 语 适 用 于 本 标 准!#4!#4##4'#4(#4)!'($%&!!)*&+,--.,-/0(123-$%&$%&#'())*实 时 荧 光!"#!4"#$!4-567,285.9:0-5;24-1,2<=5;<=/1-脱 氧 核 苷 三 磷 酸!>%?!3-012.+:9,@-/./07;2;溶 解 曲 线 分 析!!"#酶栖 热 水 生 菌567聚 合 酶!%AB!:715:=,53-5624/;-B细 胞 色 素 氧 化 酶 0亚 基!%1!1=,-;=504:7:0-循 环 阈 值!'!原 理实 蝇 样 本 $卵 #幼 虫 #蛹 或 成 虫 %经 过 提 取 总 基 因 组567后 &利 用 设 计 的 特 异 性引 物 &通 过 常 规!"#和$$%&#'())*实时 荧 光!"# $'8!"#%技 术 &特 异性 扩 增 地中 海 实 蝇9:567"10基因 片段$2;2<%&根据 !"#扩 增 结 果 $常 规 !"#通过 产 物 凝 胶 电 泳 结 果 ($'8!"#通 过 扩 增 曲 线 和 溶 解 曲线%&=> 版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售!"!#!"#$"!""%判 定 实 蝇 标 本 的 种 类 是 否 是 地 中 海 实 蝇!特 异 性 引 物 是 通 过 比 对 地 中 海 实 蝇 与 腊 实 蝇属 中 的 纳 塔 尔 实 蝇 #非 洲 芒 果 实 蝇 &按 实 蝇 属 中 的 加 勒比 按 实 蝇 #墨 西 哥 按 实 蝇 &以 及 绝 大 多 数 果 实 蝇的 9:567"10基 因 片 段 设 计 出 来 的!(!仪 器(4&!!"#扩 增 仪!(4!!实 时 荧 光 !"#仪 !(4#!电 泳 仪!(4'!紫 外 分 光 光 度 计!(4(!凝 胶 成 像 系 统!(4)!低 温 冰 箱!(4%!冷 藏 冷 冻 冰 箱!(4*!水 浴 锅!(4$!离 心 机!(4&"!电 子 天 平!(4&&!微 量 加 样 器 $?4@ A.A>? A.? A>??A.?? A>??? A### ## %!#""""""")!试 剂)4&!实 验 用 水 $应 符 合'&+,,-.中 一 级 水 的 规 格%!)4!!蛋 白 酶 B.?9C9A'$'%!)4#!#67消 化 酶!)4'!D5+7$?4@9EF'A&=G-4?%!)4(!+D$=G-4?%!)4)!>?HAEIJK*C&LMM)($电 泳 上 样 缓 冲 液%!)4%!AIJJ)(567NI(O)(!)4*!琼 脂 糖!)4$!567染 色 剂!)4&"!昆 虫 基 因 组 567提取 试 剂 盒!)4&&!567快 速 纯 化'回收 试 剂 盒!)4&!!P?Q和 33433Q乙 醇!)4&#!酚 #三 氯 甲 烷 #异 丙 醇 #异 戊 醇 等 有 机试 剂 &有 机 试 剂 如 未 有 特 殊 说 明 &均 为 分 析 醇!)4&'!!"#试 剂 盒 )包 括 >?H!"#缓冲 液#NC.@99EFA J6+!.4@99EFA' %#$' %*!.R$)4&(!!"#酶!)4&)!.H$%&#'())*NIS:)(NKT!)4&%!引 物 $>?=9EF A'%!"%