进出口蜂产品中 10-羟基 -α -癸烯酸的检验方法毛细管电泳法Inspection of 10-hydroxy-α -decenoic acid in bee products for importand export Capillary electrophoresis methodSN／ T1405—2004前言本标准的附录 A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国湖北出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：林雁飞、孙保国、胡小钟、余建新、曾静、王鹏、李晶。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。1 范围本标准规定了进出口蜂产品中10-羟基-α -癸烯酸 (10-HDA)检验的抽样、制样和毛细管电泳检验方法。本标准适用于进出口蜂王浆及蜂王浆冻干粉中10-羟基-α -癸烯酸(10-HDA)的检验。2抽样和制样2.1 检验批蜂王浆以不超过1 000 kg为一检验批，蜂王浆冻干粉以不超过250 kg为一检验批。同一检验批商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格、等级等。2.2 抽样数量抽样数量见表1。表 1单位为件批量抽样量1 l～5051～100>10057102.3抽样和制样方法按2.2规定的抽样件数随机抽取，逐件开启，从每件内抽取一罐 (袋)作为原始样品，将样品混匀后分为两等份，每份不少于 20 g。加封后，标明标记，一份留存，另一份及时送交实验室。在抽样和制样的操作过程中必须防止样品受到污染和发生含量的变化。2.4 试样保存试样于 -18℃以下冷冻保存。3 试验方法3.1 方法提要在酸性条件下，用乙醇提取试样中的10-HDA，经离心后，取上清液与缓冲液混合后用毛细管电泳仪测定，内标法定量。3.2试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为去离子水。3.2.1无水乙醇：优级纯。3.2.2盐酸溶液：0.03 mol／ L 水溶液。3.2.3内标物：对羟基苯甲酸甲酯，含量 99.0％。3.2.4内标溶液：取已干燥过的对羟基苯甲酸甲酯约0.65 g(准确至 0.000 2g)，加无水乙醇溶解并移人1 000 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。此溶液每毫升含内标物约0.65 mg。3.2.5十二烷基硫酸钠 (SDS)。3.2.6十水合四硼酸钠(四硼酸钠)。3.2.7缓冲溶液 (pH值为9.2)：称取 2.86 g四硼酸钠 (3.2.6)， 0.718 gSDS(3.2.5)，用水溶解，并用水定容至100 mL。此溶液含四硼酸钠0.075 mol／ L， SDS 0.025 mol／ L。2 3.2.8 10-HDA标准品：99.0％以上。使用前在放有浓硫酸的干燥器内减压干燥24 h。3.2.9 10-HDA标准溶液：取干燥后的10-HDA标准品约 0.025 g(准确至0.0002 g)，加无水乙醇溶解并移入25mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。此溶液每毫升含10-HDA约1 mg。3.3 仪器和设备3.3.1毛细管电泳仪：带紫外检测器。3.3.2超声波清洗仪。3.3.3涡旋混匀器。3.3.4离心机： 4 000 r／ min、 16 000 r／ min。3.3.5离心管： 15 mL、 1.5 mL具塞离心管。3.4 测定步骤3.4.1蜂王浆：试样解冻至室温，用玻璃棒充分搅匀。称取 0.5 g样品(准确至。.001 g)，置于 50 mL容量瓶中，加入2mL盐酸溶液(3.2.2)，置涡旋混匀器上混合使试样溶解。加入30 mL无水乙醇 (3.2.工 )，边加边轻轻摇动。再定量加入10.0 mL内标溶液 (3.2.4)，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，立即在超声波清洗仪中超声 15 min，取出，转入15 mL离心管，在3 000 r／ min离心10min.准确取上清液0.5 mL，转入1.5mL离心管，加入0.5 mL 缓冲溶液(3.2.7)，混匀后在 16 000 r／ min离心 10 min进行测定。3.4.2蜂王浆冻干粉：试样解冻至室温，称取0.15 g(准确至0.001 g) ，置于50 mL容量瓶中，加入20mL无水乙醇(3.2.1)， 2 mL盐酸溶液(3.2.2) ，置涡旋混匀器上混合使试样溶解。再定量加入10.0 mL内标溶液 (3.2.4)，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，立即在超声波清洗仪中超声15 min，取出，转入15 mL离心管，在 3 000 r／ min离心 10 min。准确取上清液0.5 mL，转入1.5 mL离心管，加入0.5 mL缓冲溶液(3.2.7)，混匀后在 16 000 r／ min离心 10 min进行测定。3.5校正因子测定定量移取0.5 mL， 1.0 mL， 2.0 mL， 3.0 mL， 4.0 mL和5.0 mL 10-HDA标准溶液(3.2.9)至 10 mL容量瓶中，定量加入2.0mL内标溶液 (3.2.4) ，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀.分别吸取此溶液 0.5 mL，加入0.5mL 缓冲溶液(3.2.7)，混匀后进行电泳分析。用峰面积计算，求出平均校正因子3 3.6 试样测定每个试样进样两次， 10