进出口食品平板菌落 计数滤膜法Platecountforexbacterialcoloniesinfoodforimportandport—MembranefiltermethodSN/T1059.3—2002前言本标准是按照GB/T1.1—1数滤膜法中的培养基、培养温度和滤膜法等内容是参考美国公职分析化学家协会993《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定》进行编写的。其中平板菌落计C)《公定分析方法》5年第16版)，结合(AOA(19917.2.05SN0168—1992《出口食品平板菌落计数》样品制备中内容，并在实验的基础上编写而成。本标准的附录A是标准的附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国天津出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：陈子红、侯丽萍、唐丹舟、张思传、孙俐。本标准首次发布。1范围本标准规定了进出口食品中平板菌落计数 滤膜法。本标准仅适用于进出口方便面、膨化食品、矿泉水、单晶糖、饮料、辣椒粒、牛奶(需用胰蛋白酶处理)中菌落计数的检验。2引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。SN0N330—1994出口食品中微生物学检验通则3抽样按S0330规定执行。4检验方法4.1方法原理将滤膜放入滤器，过滤样品，使细菌留在膜表面。将滤膜放在胰化大豆坚牢绿琼脂(TSFA)培养基上培养，产生深、浅绿色菌落，进行计数。444...2设备和材料22..1滤器：一套，备有预滤器。2真空泵。4444444.......2222222.......3滤膜：有机或水相，孔径为0.4培养箱：336℃±1℃。5℃±1℃。5水浴箱：6 吸管：L，具刻度。7 玻璃三角瓶和广口瓶：L，500mL。8 试管：m，玻璃制。9玻璃珠：直径1mL、10m200m17mm×170m5mm。 44444444444............222...1110平皿：直径1天平：感量2均质器。90mm。g。0.13培养基和试剂3333....1蛋白胨-吐温80(PT)稀释液(见附录AA1A)。)。)。2胰化大豆-坚牢绿琼脂3三(羟甲基)胺甲烷4胰蛋白酶贮存液(见附录(TSFA)(见附录A2Tris缓冲剂(见附录AA3AA4)。4样品制备444...1以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内。如有包装，则用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。2样品匀液制备412.1固体或半固体食品：以无菌操作取25g样品，放入装有225mLPT稀释液的灭菌均质杯内，于8000r／min，均质1min～2min，制成1∶0的样品匀液。如样品均质时间超过2min，应在均质杯外加冰水冷却。4.4样品混匀，制成.2.2干燥或干粉食品：以无菌操作取1∶10的样品匀液。振摇时，幅度25g样品，放入装有c225ms内振摇25次，也可用机械振荡器振荡15LPT稀释液的500mL灭菌广口瓶中（瓶内预置适当数量的玻璃珠）。迅速振摇，将s代替手摇。30m，741.4.0的样品匀液。吸取样品时，吸管插入液面下不要超过2.3液体食品：用灭菌吸管吸取25mL样品，放入装有2.2255mLPT稀释液的500cm。吸管内液体要在mL的灭菌广口瓶中，按4.4.2s内完全排入稀释液中。不要在稀释液中吹洗吸管。.2条中所述的方法，迅速振摇，制成1∶2s～444..4.3稀释样品匀液40..0的样品液。31用10mL灭菌吸管准确吸取1∶10的样品匀液10mL放入装有90mLPT稀释液的200mL灭菌广口瓶中。按4.4.2.2中所述的方法，迅速振摇，制成1∶144..44..3.2分别用10mL灭菌吸管按4.4.3.……4酶处理的食品需要酶处理的食品取1∶10PT样品匀液10mL加酶原液1mL，在灭菌试管中混合放入35℃±1℃水浴中处理20min～30min，取出过滤。4.5过滤对每一份试样，选用适宜的三个连续稀释度的样液，每个稀释度的样液分别过滤两次。将灭菌的过滤装置连接于真空抽滤瓶上，以无菌操作将无菌滤膜放在抽滤底座上，用不锈钢夹子固定。以无菌操作加10mL～20mL无菌蒸馏水于滤器中，加入PT样品匀液10mL，打开真空泵，抽吸过滤，再加入10mL～15mL无菌蒸馏水，抽吸过滤，关闭真空泵。用无菌镊子将滤膜取出。4.6培养以无菌操作将滤膜取出放于预先干燥的TSFA琼脂平板表面上，滤膜和琼脂表面之间应无气泡。将TSFA琼脂平板，平放入36℃±1℃培养箱内培养4448..h。7计数7.1培养后，对每个Th。SFA琼脂平板上产生的深、浅绿色菌落进行计数。25～250个菌落为合适范围。如果不能立即计数，应将平板存放于0℃～4℃，但不得超过244.7.2如只有一个稀释度的两个平板上的菌落在合适范围内，先计算两个平板的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克(毫升)〔g(mL)〕样品中平板菌数。4.7.3如有两个稀释度在合适范围内，先计算每个稀释度两个平板的平均值。再计算两个稀释度的平均值，然后计算每克(毫升)〔g(mL)〕样品中平板菌落数。4.7.稀释倍数，得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号（4当最低稀释度的两个平板上都少于25个菌落时，计数这一稀释度两个平板上的实际菌落数。计算两个平板上的平均菌落数，将平均菌落数乘以*