GB 5500—85粮食、油料检验甘薯片纯质率检验法I nspecti onofgr ai n andoi - l seeds Met hods f ordet er mi nat i on ofpur i t y r at e ofsweet pot at o f l akes1985-11-021986-07-01 中华人民共和国国家标准粮食、油料检验甘薯片纯质率检验法I nspect i onof gr ai nandoi - l seeds Met hodsf ordet er mi nat i onof pur i t yr at eofsweet pot at of l akesGB 5500—851适用范围本标准适用于谷物中维生素B2含量的测定。2测定原理维生素B2（即核黄素）在445nm紫外光激发下产生荧光，在一定浓度范围内其荧光强度与核黄素浓度成正比。用连二亚硫酸钠还原核黄素成无荧光物质，由还原前后荧光强度之差与内标荧光强度的比值，计算样品中核黄素的含量。3仪器和设备3. 1荧光分光光度计；3. 2分析天平（感量1mg，0. 1mg）；3. 3电热恒温水浴；3. 4具塞玻璃刻度试管，15mL。4试剂除有说明外均为分析纯，所用水为蒸馏水。4. 1盐酸（GB 622—77），0. 1mol / L盐酸溶液：将8. 5mL盐酸用水稀释至1000mL。4. 2冰乙酸（GB 676—78）。4. 30. 02mol / L冰乙酸溶液，将1. 8mL冰乙酸用水稀释至1000mL。4. 4无水乙酸钠（GB 694—81）或结晶乙酸钠（GB693—77），2. 5mol / L水溶液。205g无水乙酸钠或345g结晶乙酸钠溶于水。稀释至1000mL。4. 5高锰酸钾（GB 643—77），40g/ L水溶液。贮于棕色瓶中，置于暗处。该溶液可保存一周。4. 6过氧化氢（HG 3—1082—77），100mL/ L水溶液。现用现配。4. 7核黄素标准溶液。4. 7. 1核黄素贮备液Ⅰ：核黄素（Q/ HG 22—1489—74）于五氧化二磷干燥器中干燥24h，称取0. 0500g，溶解于0. 02mol / L乙酸溶液（4. 3）中，在蒸汽浴上恒速搅动至溶解，冷却后定容至500mL。盛入棕色瓶加甲苯覆盖，低温（4℃）保存。该溶液每毫升含0. 1mg核黄素。 4. 7. 2核黄素贮备液Ⅱ：取核黄素贮备液Ⅰ（4. 7. 1）10mL，用0. 02mol / L乙酸溶液（4. 3）定容至100mL。盛入棕色瓶中加甲苯覆盖，低温（4℃）保存。该溶液每毫升含10μg核黄素。4. 7. 3核黄素标准工作液：取核黄素贮备液Ⅱ（4. 7. 2）5mL。用水定容至100mL，现用现配。该溶液每毫升含0. 5μg核黄素。测定样品前，预先在相同的条件下测定标准工作液的荧光强度，如有异常，需重新配制标准溶液。4. 8荧光素标准溶液4. 8. 1荧光素贮备液：称取荧光素（Q/ HG 22—786—68）0. 0500g，用水溶解后定容至1000mL。盛入棕色瓶中，低温（4℃）保存。该溶液每毫升含50μg荧光素。4. 8. 2荧光素标准工作液：取荧光素贮备液（4. 8. 1）1mL，用水定容至1000mL。盛入棕色瓶中，低温保存。该溶液每毫升含0. 05μg荧光素。4. 9连二亚硫酸钠（Na2S2O4）（Q/ HG 2—001—65）。5试样的选取和制备5. 1选取有代表性的谷物样品（带壳籽粒需脱壳），拣净杂质，按四分法缩减取样。5. 2将样品在60～65℃烘干后粉碎，过60号筛（0. 25mm），装入磨口瓶中备用。6测定步骤6. 1称样：称取谷物样品2～5g（准确至0. 001g），约含核黄素5μg。将待测样品置于100mL容量瓶中。同时称样，按GB 3523—83《谷物、油料作物种子水分测定法》测定样品的水分含量。6. 2制备样液：往盛样品的容量瓶中加75mL盐酸溶液（4. 1），于沸水浴中加热30mi n。开始加热的5～10mi n时常摇动容量瓶，以防样品结块。冷却至室温后，加5mL乙酸钠溶液（4. 4）摇匀，用水定容。该试液的pH为4. 5。通过中速干滤纸过滤，弃去最初的5～10mL滤液，收集滤液于100mL锥形瓶中。以下操作应避免直射光。6. 3杂质氧化：于a、b、c三支15mL刻度试管中各吸入样液（6. 2）10mL（同时做平行），往试管a加入1mL核黄素标准工作液（4. 7. 3），往试管b、c各加入1mL蒸馏水。然后各加入冰乙酸（4. 2）1mL，旋摇混匀后逐个加入高锰酸钾溶液（4. 5）0. 5mL，旋摇混匀，静置2mi n再逐个加入过氧化氢溶液（4. 6）0. 5mL旋摇，使高锰酸钾颜色在10s内消退。加盖摇动试管，使试管中的气体逸尽。6. 4测定：用荧光素溶液（4. 8. 2）调整荧光仪，使其稳定于一定数值，作为仪器工作的固定条件。调激发波长445nm，发射波长530nm，测定试管a、b的荧光强度，样液在仪器中受激发光照射不超过10s。在试管c中加入20～30mg连二亚硫酸钠，摇动溶解，并使试管中的气体逸出，迅速测定其荧光强度作为空白。若溶液出现浑浊，不能读数。 7测定结果的计算7. 1计算公式核黄素（μg/ g，干基）=（B-C）/（A-B）×（V/V1）×{R/〔m（1-H）〕式中：A──试管a（样液加标样）的荧光强度；B──试管b（样液加水）的荧光强度；C──试管c（样液加连二亚硫酸钠）的荧光强度，空白；R──加入核黄素标样的量，μg；V──样液的初始体积，mL；V1──测定时取样液的体积，mL；m──样品质量，g；H──样品的水分百分率。7. 2平行测定的结果用算术平均值表示，保留小数后二位，第三位按GB 1. 1—81《标准化工作 导则编写标准的一般规定》中附录C数字修约规则取舍。7. 3平行测定的相对差不得超过5％。