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GB 5500—85粮食、油料检验甘薯片纯质率检验法I nspecti onofgr ai n andoi - l seeds Met hods f ordet er mi nat i on ofpur i t y r at e ofsweet pot at o f l akes1985-11-021986-07-01 中华人民共和国国家标准粮食、油料检验甘薯片纯质率检验法I nspect i onof gr ai nandoi - l seeds Met hodsf ordet er mi nat i onof pur i t yr at eofsweet pot at of l akesGB 5500—851适用范围本标准适用于谷物中维生素B2含量的测定。2测定原理维生素B2(即核黄素)在445nm紫外光激发下产生荧光,在一定浓度范围内其荧光强度与核黄素浓度成正比。用连二亚硫酸钠还原核黄素成无荧光物质,由还原前后荧光强度之差与内标荧光强度的比值,计算样品中核黄素的含量。3仪器和设备3. 1荧光分光光度计;3. 2分析天平(感量1mg,0. 1mg);3. 3电热恒温水浴;3. 4具塞玻璃刻度试管,15mL。4试剂除有说明外均为分析纯,所用水为蒸馏水。4. 1盐酸(GB 622—77),0. 1mol / L盐酸溶液:将8. 5mL盐酸用水稀释至1000mL。4. 2冰乙酸(GB 676—78)。4. 30. 02mol / L冰乙酸溶液,将1. 8mL冰乙酸用水稀释至1000mL。4. 4无水乙酸钠(GB 694—81)或结晶乙酸钠(GB693—77),2. 5mol / L水溶液。205g无水乙酸钠或345g结晶乙酸钠溶于水。稀释至1000mL。4. 5高锰酸钾(GB 643—77),40g/ L水溶液。贮于棕色瓶中,置于暗处。该溶液可保存一周。4. 6过氧化氢(HG 3—1082—77),100mL/ L水溶液。现用现配。4. 7核黄素标准溶液。4. 7. 1核黄素贮备液Ⅰ:核黄素(Q/ HG 22—1489—74)于五氧化二磷干燥器中干燥24h,称取0. 0500g,溶解于0. 02mol / L乙酸溶液(4. 3)中,在蒸汽浴上恒速搅动至溶解,冷却后定容至500mL。盛入棕色瓶加甲苯覆盖,低温(4℃)保存。该溶液每毫升含0. 1mg核黄素。 4. 7. 2核黄素贮备液Ⅱ:取核黄素贮备液Ⅰ(4. 7. 1)10mL,用0. 02mol / L乙酸溶液(4. 3)定容至100mL。盛入棕色瓶中加甲苯覆盖,低温(4℃)保存。该溶液每毫升含10μg核黄素。4. 7. 3核黄素标准工作液:取核黄素贮备液Ⅱ(4. 7. 2)5mL。用水定容至100mL,现用现配。该溶液每毫升含0. 5μg核黄素。测定样品前,预先在相同的条件下测定标准工作液的荧光强度,如有异常,需重新配制标准溶液。4. 8荧光素标准溶液4. 8. 1荧光素贮备液:称取荧光素(Q/ HG 22—786—68)0. 0500g,用水溶解后定容至1000mL。盛入棕色瓶中,低温(4℃)保存。该溶液每毫升含50μg荧光素。4. 8. 2荧光素标准工作液:取荧光素贮备液(4. 8. 1)1mL,用水定容至1000mL。盛入棕色瓶中,低温保存。该溶液每毫升含0. 05μg荧光素。4. 9连二亚硫酸钠(Na2S2O4)(Q/ HG 2—001—65)。5试样的选取和制备5. 1选取有代表性的谷物样品(带壳籽粒需脱壳),拣净杂质,按四分法缩减取样。5. 2将样品在60~65℃烘干后粉碎,过60号筛(0. 25mm),装入磨口瓶中备用。6测定步骤6. 1称样:称取谷物样品2~5g(准确至0. 001g),约含核黄素5μg。将待测样品置于100mL容量瓶中。同时称样,按GB 3523—83《谷物、油料作物种子水分测定法》测定样品的水分含量。6. 2制备样液:往盛样品的容量瓶中加75mL盐酸溶液(4. 1),于沸水浴中加热30mi n。开始加热的5~10mi n时常摇动容量瓶,以防样品结块。冷却至室温后,加5mL乙酸钠溶液(4. 4)摇匀,用水定容。该试液的pH为4. 5。通过中速干滤纸过滤,弃去最初的5~10mL滤液,收集滤液于100mL锥形瓶中。以下操作应避免直射光。6. 3杂质氧化:于a、b、c三支15mL刻度试管中各吸入样液(6. 2)10mL(同时做平行),往试管a加入1mL核黄素标准工作液(4. 7. 3),往试管b、c各加入1mL蒸馏水。然后各加入冰乙酸(4. 2)1mL,旋摇混匀后逐个加入高锰酸钾溶液(4. 5)0. 5mL,旋摇混匀,静置2mi n再逐个加入过氧化氢溶液(4. 6)0. 5mL旋摇,使高锰酸钾颜色在10s内消退。加盖摇动试管,使试管中的气体逸尽。6. 4测定:用荧光素溶液(4. 8. 2)调整荧光仪,使其稳定于一定数值,作为仪器工作的固定条件。调激发波长445nm,发射波长530nm,测定试管a、b的荧光强度,样液在仪器中受激发光照射不超过10s。在试管c中加入20~30mg连二亚硫酸钠,摇动溶解,并使试管中的气体逸出,迅速测定其荧光强度作为空白。若溶液出现浑浊,不能读数。 7测定结果的计算7. 1计算公式核黄素(μg/ g,干基)=(B-C)/(A-B)×(V/V1)×{R/〔m(1-H)〕式中:A──试管a(样液加标样)的荧光强度;B──试管b(样液加水)的荧光强度;C──试管c(样液加连二亚硫酸钠)的荧光强度,空白;R──加入核黄素标样的量,μg;V──样液的初始体积,mL;V1──测定时取样液的体积,mL;m──样品质量,g;H──样品的水分百分率。7. 2平行测定的结果用算术平均值表示,保留小数后二位,第三位按GB 1. 1—81《标准化工作 导则编写标准的一般规定》中附录C数字修约规则取舍。7. 3平行测定的相对差不得超过5%。