ICS 67.080B 05DB32备案号：江苏省地方标准DB32/T 1659—2010杏鲍菇菌种生产技术规程 Technical rules of Pleurotus Eryngii pure culture production 2010-10-12发布 2010-12-12实施江苏省质量技术监督局发布 DB32/T 1659—2010前言为了实现杏鲍菇菌种生产技术规范化，确保菌种质量，维护菌种生产者、经营者和使用者的合法权益，特制定本标准。本标准按照GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》编写。本标准由江苏江南生物科技有限公司提出。本标准由江苏江南生物科技有限公司起草。本标准主要起草人：姜建新、马一鸣、姜小红、姜雅、荆琴芳。I DB32/T 1659—2010杏鲍菇菌种生产技术规程1范围本标准规定了杏鲍菇菌种生产的场地环境、设施设备、生产技术、标识、包装、运输及贮存。本标准适用于江苏省行政区域内生产、经销、使用的杏鲍菇母种、原种和栽培种。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 191GB 5749GB 15569NY 5099NY/T 528包装储运图示标志生活饮用水卫生标准农业植物调运检疫规程食用菌栽培基质安全技术要求食用菌菌种生产技术规程3场地环境3.1应选择地势高燥、排水畅通、通风良好、交通便利的地方建造菌种场。3.2菌种场应远离有“三废”污染的工厂、生活区、禽畜养殖场等。3.3应选用清洁水源，水质符合GB 5749规定。3.4生产场地环境卫生及其他条件符合NY/T 528的规定。4设施设备4.1基本设施具备控温控湿条件的冷却室、接种室、培养室和贮存室。4.2基本设备磅秤、天平、高压灭菌锅或常压灭菌锅、操作台、超净工作台或接种箱、空调、除湿机、培养架、恒温箱、冰箱、显微镜等。生产量大的菌种厂还应配备搅拌机、装瓶装袋机。5生产技术5.1母种生产5.1.1培养基PDA培养基或PSA培养基5.1.2培养基制作1 DB32/T 1659—20105.1.2.1分装将配制好的PDA培养基或PSA培养基分装至符合NY/T528规定的 Φ18㎜×180㎜或Φ20㎜×200㎜的玻璃试管中，装量为试管长度的1/3左右。试管口应保持干净，随后塞入棉塞或硅胶塞，并用牛皮纸包扎。5.1.2.2灭菌将分装和包扎好的试管直立放在高压灭菌锅内加热灭菌。加热到0.05MPa时，打开排气阀，排尽锅内空气，待压力指针回到零点后，关闭排气阀。重复操作两次。当压力升到0.1MPa（温度为121℃）时，维持30min后停止加热，待指针回到零点，再打开锅盖。5.1.2.3斜面培养基制作从灭菌锅内取出试管，当试管冷却到60℃左右时，趁热将试管倾斜摆放在操作台桌面上，试管口比试管底部高1.0㎝～1.5㎝，做成培养基斜面，斜面长度为试管长度的2/3。5.1.2.4灭菌效果检查将灭菌后的培养基置于30℃±2℃条件下1d～2d检查有无细菌或霉菌的菌斑。5.1.3消毒与接种5.1.3.1消毒将接种用具、培养基放到接种箱或超净工作台内。接种箱应用气雾消毒剂消毒，用量5g/m ；有紫3外线灭菌灯的，同时开启照射30min。超净工作台使用前应开机30min预热。5.1.3.2接种消毒后进行接种。接种人员要注意清洁卫生，穿戴上经消毒过的工作服、工作帽、口罩，按无菌操作要求，手部和试管菌种表面应用医用酒精消毒。将接种用具用酒精灯进行火焰灭菌，放于箱内支架上冷却后备用。在酒精灯火焰四周的无菌区进行接种操作。开始接种时，左手同时握着转接母种和待接斜面培养基，试管口置于酒精灯火焰上方3㎝处的无菌区，用右手迅速分别拔开试管棉花塞，并用接种钩在转接母种试管中挑取绿豆粒大小的菌种体迅速转接到待接斜面培养基内。接种位置为培养基斜面前端1㎝处，且菌种体菌丝面朝上。接种后迅速塞上棉花塞。将接种好的斜面培养基用牛皮纸包扎试管口，并贴标有菌号和接种日期的标签。标签粘贴位置为距试管口8㎝处。5.1.4培养将接种后的试管置于20℃～28℃培养箱或培养室恒温培养8d～10d，当菌丝长满试管斜面，即可用于生产原种。5.2原种生产5.2.1培养基要求应符合NY 5099的规定。5.2.2培养料配方配方1：棉籽壳87％、麸皮10％、蔗糖1％、生石灰1％、石膏1％，料水比1:（1.2～1.3）。配方2：棉籽壳50％、木屑30％、麸皮17％、蔗糖1％、石膏1％、生石灰1％，料水比1:（1.2～1.3）。配方3：玉米芯50％、木屑33％、麸皮15％、石膏1％、生石灰1％，料水比1:（1.2～1.4）。2 DB32/T 1659—20105.2.3拌料按配方比例称取原料，按料水比加水进行人工或机械搅拌。5.2.4装瓶用750ml玻璃菌种瓶装料，料瓶稍压实装料量至瓶肩为度，后塞棉塞，牛皮纸包扎瓶口。5.2.5灭菌将分装好的原种培养料移入高压蒸汽灭菌锅内密闭加热升温。当压力表指针升至0.05MPa时，打开排气阀，排放锅内空气，待压力表指针降至零时，关闭排气阀，继续加热升温。当压力表指针升至0.1MPa时，打开排气阀，排放锅内空气，待压力表指针降至零时，关闭排气阀，继续加热升温。保持压力0.14MPa～0.15MPa（温度为126℃）时，维持2h。保压结束，停止加热，当灭菌锅压力表指针降至零时，打开锅盖，取出培养料进行冷却。5.2.6消毒与接种5.2.6.1消毒按5.1.3.1规定执行。5.2.6.2接种按5.1.3.2规定执行，每支母种接5瓶至8瓶原种。5.2.7培养在22℃～27℃下培养30d～40d，待菌丝长满瓶时结束培养。5.3栽培种生产5.3.1培养基要求应符合NY 5099的规定。5.3.2培养料配方按5.2.2规定执行。5.3.3堆制发酵按5.2.3规定执行。5.3.4装袋用20㎝×38㎝×0.05㎜规格的聚丙烯塑料袋装料，料袋稍加压实至料高25㎝为度，袋口套上塑料环，塞上棉塞，包扎牛皮纸。5.3.5灭菌高压灭菌按5