犐犆犛６５．０２０．２０ 犅０５ 江苏省地方标准 犇犅３２／犜３５１９—２０１９ 芋头脱毒快繁技术规程 犜犲犮犺狀犻犮犪犾狉犲犵狌犾犪狋犻狅狀狅犳狉犪狆犻犱狆狉狅狆犪犵犪狋犻狅狀犳狅狉狏犻狉狌狊犳狉犲犲狋犪狉狅 ２０１９０１１２发布２０１９０１３０实施 江苏省市场监督管理局发布 前言 本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。 本标准由江苏省农业科学院提出并归口。 本标准起草单位：江苏省农业科学院。 本标准主要起草人：殷剑美、张培通、王立、韩晓勇。 Ⅰ 犇犅３２／犜３５１９—２０１９ 芋头脱毒快繁技术规程 １范围 本标准规定了芋头脱毒组培苗培育、脱毒种芋繁殖体系的大田管理和种芋采收、预处理、贮存等采 后环节的质量控制技术。 本标准适用于江苏省地方特色芋头品种的脱毒种芋繁殖工作。 ２规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 ＧＢ／Ｔ８３２１农药合理使用准则 ＮＹ／Ｔ４９６肥料合理使用准则通则 ＮＹ／Ｔ５０１０无公害食品种植业产地环境条件 ３术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 ３．１ 脱毒原原种芋狏犻狉狌狊犳狉犲犲犫狉犲犲犱犲狉狊犲犲犱狋犪狉狅 用组织培养方法对芋头进行脱毒，获得无病毒组培苗后，在防虫条件下种植获得的种芋。 ３．２ 脱毒原种芋狏犻狉狌狊犳狉犲犲犳狅狌狀犱犪狋犻狅狀狊犲犲犱狋犪狉狅 由脱毒原原种芋在防虫条件下种植获得的种芋。 ３．３ 脱毒种芋狏犻狉狌狊犳狉犲犲狊犲犲犱狋犪狉狅 由脱毒原种芋在符合条件产地种植获得的种芋。 ４生产基础条件要求 ４．１环境要求 符合ＮＹ／Ｔ５０１０规定。 ４．２生产主体要求 符合《中华人民共和国种子法》和《农作物种子生产经营许可管理办法》规定的经营主体。 ４．３脱毒组培苗扩繁基地要求 组培室组成包括准备室、接种室、培养室。培养室规模应与脱毒核心种芋繁殖圃面积相匹配，按照 每万株脱毒组培苗２０ｍ２ 建设。脱毒种芋按照“三级扩繁”体系建设，脱毒原原种芋繁殖圃、脱毒原种芋 １ 犇犅３２／犜３５１９—２０１９ 繁殖田、脱毒种芋繁殖田面积比为１∶１２∶２００。 ４．４脱毒原原种芋繁殖基地要求 ４．４．１繁殖基地经营主体要求 需在专业化种芋生产单位进行，应具有防虫网棚内种植条件，由专业技术人员负责田间管理和去杂 除劣操作等。 ４．４．２防虫网棚建设 防虫网选用４０目～６０目优质尼龙纱网，棚内空间大（棚高２ ｍ 以上，宽６ ｍ～８ ｍ），结构稳定，利 于田间作业，具有较强的抗风性。 ４．４．３繁殖田块要求 靠近水源，排灌方便；选择土层深厚、土壤肥沃的偏沙性壤土；未种植芋头及甘薯、马铃薯、山药等地 下根茎类作物１年以上；田间灌排沟系配套，水利设施齐全，达到“旱能灌，涝能排”。 ４．５脱毒原种芋繁殖基地要求 ４．５．１繁殖基地经营主体要求 见４．４．１。 ４．５．２防虫网棚建设 见４．４．２。 ４．５．３繁殖田块要求 见４．４．３。 ４．６脱毒种芋繁殖基地要求 ４．６．１繁殖基地经营主体要求 见４．４．１。 ４．６．２繁殖田块要求 见４．４．３。 ５芋头脱毒组培苗培育 ５．１外植体培养和处理 以芋头茎尖为外植体。选取保存完好、无病斑的芋头，经质量比０．２％的高锰酸钾（ＫＭｎＯ４）灭菌处 理５ｍｉｎ，用灭菌后的细沙覆盖整个芋头的２／３处，放置于光照培养箱中促其萌发。当芽生长到１ｃｍ～ ３ｃｍ 时切取茎尖，剥除茎尖外层２层～３ 层叶片，流水冲洗１０ ｍｉｎ，在超净工作台上用７５％ 酒精浸泡 ３０ｓ，用３％次氯酸钠（ＮａＣｌＯ）溶液消毒１０ｍｉｎ～１５ｍｉｎ，无菌水漂洗５次～７次。剥离茎尖外层叶鞘， 在解剖镜下剥取０．４ｍｍ～０．８ｍｍ 大小茎尖作为外植体。 ２ 犇犅３２／犜３５１９—２０１９ ５．２愈伤组织诱导和组培苗芽形成 将剥取的外植体接种在ＭＳ ＋ ２，４二氯苯氧乙酸（２，４Ｄ）２．０ ｍｇ／Ｌ 的培养基中，在温度２５ ± ２ ℃、光照强度２２００ｌｘ左右的培养室内无菌培养５０ｄ—６０ｄ，诱导形成愈伤组织。芋愈伤组织在上述 培养基和培养条件下再经６０ｄ左右培养，分化出芽。 ５．３病毒鉴定 将组培苗芽切下，接种在ＭＳ ＋ 噻苯隆（ＴＤＺ）１．０ ｍｇ／Ｌ 的培养基中，长到两叶以上时（２０ｄ左 右），取部分叶片利用酶联免疫分析（ＥＬＩＳＡ）法进行芋头花叶病毒（ＤＭ