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版权所有·禁止翻制、电子发售 中 华 人 民 共 和 国 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准 犛犖／犜２８７０ —２０１１ 中 肠 腺 坏 死 杆 状 病 毒 病 检 疫 技 术 规 范 犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲 狆狉狅狋狅犮狅犾犳狅狉 犫犪犮狌犾狅狏犻狉犪犾 犿犻犱犵狌狋犵犾犪狀犱 狀犲犮狉狅狊犻狊 ２０１１０５３１ 发 布 ２０１１１２０１ 实 施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布 版权所有·禁止翻制、电子发售 犛犖／犜２８７０ —２０１１ 前 言 本 标 准 按 照 ＧＢ／Ｔ１．１—２００９ 给 出 的 规 则 起 草 。 本 标 准 由 国 家 认 证 认 可 监 督 管 理 委 员 会 提 出并 归 口。 本 标 准 起 草 单 位 ：中 华 人 民 共 和 国 深 圳 出入 境 检 验 检 疫 局。 本 标 准 主 要 起 草 人 ：刘 渤 、陈 莉 莉 、宗卉 、罗 卫 、江 育 林。 Ⅰ 版权所有·禁止翻制、电子发售 犛犖／犜２８７０ —２０１１ 中 肠 腺 坏 死 杆 状 病 毒 病 检 疫 技 术 规 范 １ 范 围 本 标 准 规 定 中 肠 腺 坏 死 杆 状 病 毒 病 （ｂａｃｕｌｏｖｉｒａｌ ｍｉｄｇｕｔ ｇｌａｎｄ ｎｅｃｒｏｓｉｓ，Ｂ Ｍ Ｎ ）的 检 测 方 法 ，是用 临 床 症 状 作 为 初 步 诊 断 ，压 片 和 组 织 病 理 切片 作 为 确 诊 的 检 疫 方 法。 本 标 准 适 用 于 中 肠 腺 坏 死 杆 状 病 毒 病 的 诊 断和 鉴 定 ，适 用 于 本 病 的 流 行 病 学 调 查 、检 疫 和 监 测。 ２ 规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的 。 凡 是注 日 期 的 引 用 文 件 ，仅 注 日 期的 版 本 适 用 于 本 文 件 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ，其 最 新 版 本 （包括 所 有 的 修 改 单 ）适 用 于 本 文 件。 ＧＢ／Ｔ６６８２ 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法 ３ 设 备 、材 料 及 试 剂 本 标 准 所 用 试 剂 除 特 殊 规 定 外 均 为 分 析 纯 ，试验 用 水 应 符 合 ＧＢ／Ｔ６６８２ 要 求。 ３．１ 石 蜡 组 织 切 片 机。 ３．２ 组 织 脱 水 机 （使 用 手 工 脱 水的 缸）。 ３．３ 石 蜡 包 埋 机。 ３．４ 切 片 染 色 机 （使 用 手 工 染 色所 需 的 缸）。 ３．５ 展 片 所 用 水 浴 锅。 ３．６ 烘 片 机。 ３．７ 正 置 显 微 镜。 ３．８ 载 玻 片 、盖 玻 片 等 常 规 组 织切 片 用 具。 ３．９ Ｄａｖｉｄｓｏｎ ’ｓ 固 定 液 （见 Ａ ．１）。 ３．１０ 石 蜡 （熔 点 ５２℃ ～５４ ℃ 或 ５０℃ ～５２ ℃ ）：切片 级。 ３．１１ 乙 醇 ：包 括 无 水 乙醇 、９５ ％ 乙 醇 、８５ ％ 乙 醇 、８０ ％ 乙 醇 、７５ ％ 乙 醇 、５０ ％ 乙 醇。 ３．１２ 二 甲 苯。 ３．１３ 盐 酸。 ３．１４ 氢 氧 化 钠。 ３．１５ 苏 木 素 染 色 液 （见Ａ ．２）。 ３．１６ 伊 红 染 色 液 （见Ａ ．３）。 ３．１７ 黏 片 剂 （见Ａ ．４）。 ４ 诊 断 方 法 ４．１ 犅犕 犖犞的 初 步 诊 断 方 法 对 于 监 测 和 检 测 Ｂ Ｍ Ｎ Ｖ ，最 好 取 幼 体 和 早 期 的 仔 虾。 临 床 症 状 ：幼 体 和 仔 虾 患 病 后 ，首 先 可以 看 到 白 浊 的 中 肠 腺 。 随 着 疾 病 的 发 展 ，白 浊 化 越 来 越 明 显， １ 版权所有·禁止翻制、电子发售 犛犖／犜２８７０ —２０１１ 越 来 越 容 易 辨 认 。 参 见 图 Ｂ ．１ ４．２ 犅犕 犖犞的 确 诊 方 法 ４．２．１ 压 片 法 用 新 鲜 对 虾 的 中 肠 腺 压 片 或 涂 片 染 色 后 在 暗视 野 下 检 查 能 快 速 诊 断 Ｂ Ｍ Ｎ 病 毒 感 染 。 将 组 织 置 于 载 玻 片 上 ，用 解 剖 刀 将 样 品 切 碎 ，盖 上盖 玻 片 ，在 暗 视 野 下 观 察。 ４．２．２ 组 织 病 理 学 技 术 ４．２．２．１ 组 织 固 定 ４．２．２．１．１ 用 Ｄａｖｉｄｓｏｎ ’ｓ ＡＦＡ 固 定 液 固 定 欲 检 查 的 虾，准 备 足 够 的 固 定 液 ，固 定液 体 积 应 是 欲 固 定 的 组 织 块 总 体 积 的 １０ 倍 ～１５倍 。 推 荐 用 Ｄａｖｉｄｓｏｎ ’ｓ ＡＦＡ固 定 液 ，该固 定 液 可 迅 速 固 定 并 减 轻 对 虾 的 自 溶 变 化 ，而 且 其 中 含 的 酸 性 成 分 可 以 除去 表 皮 的 石 灰 质。 ４．２．２．１．２ 对 虾 幼 体 或 仔 虾 ，用 细 网 筛 或 者吸 管 把 所 选 的 幼 体 或 仔虾 直 接 放 入 固 定 液 。 固 定１２ ｈ～ ２４ ｈ，然 后 转 入 ５０ ％ ～７０ ％的 乙 醇 中 保 存。 ４．２．２．１．３ 稍 大 的 仔 虾 和 很 小 的 稚 虾 ：用 针 或 尖 头 镊 子 切去 体 表 虾 壳 ，把 虾 直 接 浸 泡 在 固 定 液 中 ，固 定 １２ ｈ～２４ｈ，然 后 转 入 ５０ ％ ～７０ ％ 的 乙醇 中 保 存。 ４．２．２．１．４ 更 大 的 仔 虾 、稚 虾 和成 虾 ，用 注 射 器 往 虾 头 处 注 入 固 定液 （用 量 为 样 品 体 积 的 ５％～ １０ ％。 针 头 大 小 根 据 虾 的 大 小 决 定 ，例 如 对 仔 虾和 小 稚 虾 可 用 ２７ 号 针 头 ）。 首 先 注 射 中 肠 腺 ，要 注 射 ２
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