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版权所有·禁止翻制、电子发售 中 华 人 民 共 和 国 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准 犛犖／犜２８０１ —２０１１ 传 染 性 念 珠 菌 病 检 疫 技 术 规 范 犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲 狆狉狅狋狅犮狅犾犳狅狉犮狅狀狋犪犵犻狅狌狊犮犪狀犱犻犱犻犪狊犻狊 ２０１１０２２５ 发 布 ２０１１０７０１ 实 施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布 犛犖／犜 ２８０１ —２０１１ 版权所有·禁止翻制、电子发售 前 言 本 标 准 按 照 ＧＢ／Ｔ１．１—２００９ 给 出 的 规 则 起 草 。 本 标 准 由 国 家 认 证 认 可 监 督 管 理 委 员 会 提 出并 归 口。 本 标 准 起 草 单 位 ：中 华 人 民 共 和 国 沈 阳 出入 境 检 验 检 疫 局 、中 华 人 民 共 和 国 山 西 出 入 境 检 验 检 疫 局 和 中 华 人 民 共 和 国 吉 林 出 入 境 检 验 检 疫 局。 本 标 准 主 要 起 草 人 ：林 颖 、廉 慧 锋 、刘金 华 、耿 庆 华 、王 金 玲 、王 芳 、贾 琳 、巩 红 霞 、张 敏 爱 。 Ⅰ 犛犖／犜 ２８０１ —２０１１ 版权所有·禁止翻制、电子发售 传 染 性 念 珠 菌 病 检 疫 技 术 规 范 １ 范 围 本 标 准 规 定 了 传 染 性 念 珠 菌 分 离 培 养 、镜检 及 鉴 定 方 法。 本 标 准 适 用 于 传 染 性 念 珠 菌 病 的 检 疫 和 诊 断 。 ２ 规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的 。 凡 是注 日 期 的 引 用 文 件 ，仅 注 日 期的 版 本 适 用 于 本 文 件 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ，其 最 新 版 本 （包括 所 有 的 修 改 单 ）适 用 于 本 文 件。 ＧＢ／Ｔ６６８２ 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法 ３ 试 剂 及 设 备 ３．１ 试 剂 ３．１．１ 生 理 盐 水 ，实 验 用 水 应 符 合 ＧＢ／Ｔ６６８２的 要 求 ，配 制 见 Ａ ．１。 ３．１．２ １０ ％ 氢 氧 化 钾 溶 液 ，配 制 见Ａ ．２。 ３．１．３ 革 兰 氏 （Ｇｒａｍｓ）染液 ，配 制 见Ａ ．３。 ３．１．４ 葡 萄 糖酵母 汁蛋白 胨 液 体 培 养 基 ，配 制 见 Ａ ．４。 ３．１．５ 沙 堡 氏 琼 脂 培 养 基 （ＳＤＡ），配 制 见 Ａ ．５。 ３．１．６ 动 物 （兔 、豚 鼠 、鸡 、牛 、羊 等 均 可 ）血 清。 ３．１．７ １％玉 米 粉 吐 温８０琼 脂 平 板 ，配 制 见 Ａ ．６。 ３．１．８ 科 玛 嘉 显 色 培 养 基 （ＣＨ ＲＯ ＭａｇａｒＴ Ｍ Ｃａｎｄｉｄａ 显 色 培 养 基 ）１）。 ３．１．９ ＡＰＩ 犆犪狀犱犻犱犪假 丝 酵 母 鉴 定 系 统 ２）。 ３．２ 设 备 ３．２．１ 电 热 鼓 风 干 燥 箱。 ３．２．２ 高 压 灭 菌 锅。 ３．２．３ 生 化 培 养 箱 ：２５ ．０ ℃ ±１℃ ，３６ ．０ ℃ ±１ ℃。 ３．２．４ 低 温 高 速 离 心 机 （转 速 ３ ０００ ｒ／ｍｉｎ 以 上）。 ３．２．５ 生 物 显 微 镜。 １） ＣＨＲＯ ＭａｇａｒＴ Ｍ Ｃａｎｄｉｄａ 显 色 培 养 基 是 由ＣＨ ＲＯ Ｍａｇａｒ公 司 提 供 的 产 品 商 品 名 ，给出 这 一 信 息 是 为 了 方 便 本部 分 的 使 用 者 。 如 果 其 他等 效 产 品 具 有 相 同 或 更 佳 效 果，则 可 使 用 那 些 等 效 产 品。 但 应 注 意 ：在 ＣＨＲＯ ＭａｇａｒＴ Ｍ Ｃａｎｄｉｄａ 显 色 培 养基 上 ，白 色 念 珠 菌 呈 绿 色 。 检 测时 ，应 注 意 可 疑 菌 落 的 挑 选 ，以避 免 漏 检。 ２） ＡＰＩ犆犪狀犱犻犱犪假 丝 酵 母 鉴 定 条 是 由 生物 梅 里 埃 公 司 提 供 的 产 品商 品 名 ，给 出 这 一信 息 是 为 了 方 便 本部 分 的 使 用 者 。 如 果 其 他 等 效 产品 具 有 相 同 的 效 果 ，则 可 使 用那 些 等 效 产 品。 １ 犛犖／犜 ２８０１ — ２０１１ 版权所有·禁止翻制、电子发售 ４ 诊 断 方 法 ４．１ 涂 片 镜 检 法 ４．１．１ 样 品 采 集 采 集 口 腔 、咽 喉 、食 道 和 嗉 囊 发 生 的 白色 假 膜 和 溃 疡 物 ，血 、尿 、粪 便 及 脏 器 组 织 。 血 、尿 等 液 体 样 品 需 经 ３ ０００ ｒ／ｍｉｎ 离 心 ３０ｍｉｎ 后 取 沉 淀 物 作 涂 片 外 ，其 他 样 品 均 可 用 生 理 盐 水 或 １０ ％ 氢 氧 化 钾 涂 片后 直 接 镜 检 或 革 兰 氏 染 色 后 镜 检。 ４．１．２ 生 理 盐 水 或 １０ ％ 氢 氧 化 钾 涂 片 镜 检 在 载 玻 片 上 加 １ 滴 生 理 盐 水 或 １０ ％ 氢 氧 化 钾 溶 液 ，将 待 检 样 品 与生 理 盐 水 或 １０ ％ 氢 氧 化 钾 溶 液 混 合 作 涂 片 ，加 盖 玻 片 后 置 显 微 镜 下 观察 。 在 涂 片 中 可 见 到 孢 子呈 卵 圆 形 成 群 或 成 链 状排 列 ，大 小 约 为 ２ μｍ ×６ μｍ，有 时 见 假 菌 丝。 ４．１．３ 革 兰 氏 （犌狉犪犿狊）染色 涂 片 经 火 焰 固 定 后 ，滴 加 草 酸 胺 结 晶 紫 液数 滴 ，染 色 １ ｍｉｎ，水洗 。 滴 加 革 兰 氏 碘液 媒 染 １ ｍｉｎ，水 洗 。 滴 加 ９５ ％ 酒 精 脱 色 ，不 断 轻 摇 玻 片 ，３ ｓ～ ５ ｓ 后 ，斜 持 玻 片 ，使酒 精 流 去 ，再 滴 ９５ ％ 酒 精 ，如 此 反 复 ２ 次 ～３次 至 无 紫 色 脱 落 为 止 。 水 洗 滴 加
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